3 概述
澱粉酶(amylase,AMY或AMS)全稱是1,4-α-D-葡聚糖水解酶,催化澱粉及糖原水解,生成葡萄糖、麥芽糖及含有α1,6-糖苷鍵支鏈的糊精。一般作用於可溶性澱粉、直鏈澱粉、糖元等α-1,4-葡聚糖,水解α-1,4-糖苷鍵的酶。
根據作用的方式可分爲α-澱粉酶(EC3.2.1.1.)與β-澱粉酶(EC3.2.1.2.):
(1)α-澱粉酶廣泛分佈於動物(唾液、胰臟等)、植物(麥芽、山萮菜)及微生物。微生物的酶幾乎都是分泌性的。此酶以Ca2 爲必需因子並作爲穩定因子,既作用於直鏈澱粉,亦作用於支鏈澱粉,無差別地切斷α-1,4-鏈。因此,其特徵是引起底物溶液粘度的急劇下降和碘反應的消失,最終產物在分解直鏈澱粉時以麥芽糖爲主,此外,還有麥芽三糖及少量葡萄糖。另一方面在分解支鏈澱粉時,除麥芽糖、葡萄糖外,還生成分支部分具有α-1,6-鍵的α-極限糊精。一般分解限度以葡萄糖爲準是35-50%,但在細菌的澱粉酶中,亦有呈現高達70%分解限度的(最終遊離出葡萄糖);
(2)β-澱粉酶與α-澱粉酶的不同點在於從非還原性末端逐次以麥芽糖爲單位切斷α-1,4-葡聚糖鏈。主要見於高等植物中(大麥、小麥、甘薯、大豆等),但也有報告在細菌、牛乳、黴菌中存在。對於象直鏈澱粉那樣沒有分支的底物能完全分解得到麥芽糖和少量的葡萄糖。作用於支鏈澱粉或葡聚糖的時候,切斷至α-1,6-鍵的前面反應就停止了,因此生成分子量比較大的極限糊精。
從上述的α-澱粉酶和β-澱粉酶的作用方式,分別提出α-1,4-葡聚糖-4-葡萄糖水解酶(α-1,4-glucan 4-glucanohydrolase)和 α-1, 4-葡聚糖-麥芽糖水解酶(α-1,4-glucan maltohydrolase)的名稱等而被使用。
人體內澱粉酶屬α-澱粉酶,又稱澱粉內切酶,不僅作用於澱粉末端,還可作用於其內部的1,4-糖苷鍵,對1,4-糖苷鍵連接的葡聚糖有特異性。但不能水解1,6-糖苷鍵連接的葡聚糖。澱粉酶主要由胰腺和唾液腺分泌,肺、肝、甲狀腺、脂肪等組織亦含有此酶。其測定主要爲比色法和速率法。
4 澱粉酶的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 取材
4.4 澱粉酶的測定原理
(1)磺-澱粉比色法:基質中的澱粉經標本中α-澱粉酶水解,生成葡萄糖、麥芽糖和糊精。剩餘澱粉則與碘液結合成藍色復合物,其顏色的深淺與酶活性成反比。
(2)對-硝基苯麥芽七糖法:對-硝基苯麥芽七糖在AMS作用下,生成一硝基苯麥芽三糖、對硝基苯麥芽四糖、麥芽三糖和麥芽四糖。前者在α-葡萄糖苷苷酶作用下,繼續水解爲對硝基苯酚和葡萄糖,對硝基苯酚生成速率與AMS活性成正比。
4.5 試劑
①基質緩衝液(0.4g/L澱粉):稱取NaCl 9g,Na2HPO422.6g(Na2HPO4·12H2O 56.94g)和KH2PO412.5g,溶於約500ml蒸餾水中,加熱至沸。另取一個燒杯,準確稱取0.4g可溶性澱粉,加入約10ml水,使其混懸後加入上述沸騰之溶液中,水洗燒杯一併倒入。冷至室溫後加入5ml 37%甲醛溶液,用蒸餾水稀釋至1000ml。pH爲7.0±0.1,冰箱保存。
②碘貯存液(0.1mol/L):稱取碘酸鉀1.7835g,碘化鉀22.5g溶於400ml水中。緩慢加入濃鹽酸4.5ml,邊加邊攪拌,用蒸餾水稀釋至500ml,混勻後置棕色瓶內,冰箱保存。
③碘應用液(0.01mol/L):取碘貯存液,用蒸餾水稀釋10倍,貯存於棕色瓶內,冰箱保存可用1個月。
(2)對-硝基苯麥芽七糖法:主要成分爲:3000U/L α-葡萄糖苷苷酶,5mmol/L對-硝基苯麥芽七糖,100mmol/L磷酸鹽緩衝液,50mmol/L NaCl。
商品試劑盒按其說明書復溶,冰箱保存可用3天。
4.6 操作方法
(1)磺-澱粉比色法:血清用生理鹽水做10倍稀釋,尿液作20倍稀釋,基質緩衝液37℃預溫5min,按表1操作。
混勻,用660nm波長,1cm光徑,用蒸餾水調零點,讀取各管吸光度。
(2)對-硝基苯麥芽七糖法:可根據本實驗室分析儀型號及說明書編程,主要參數爲:波長405nm,37℃,標本與試劑體積之比爲1∶20(尿液在實驗前用生理鹽水稀釋1倍,結果乘2),延遲時間3min,線性時間10min,動力法。
4.7 正常值
血清800~1800U/L;
尿液1000~12000U/L。
(2)對-硝基苯麥芽七糖法:血清(漿)100~220U/L,尿液120~1200U/L。
4.8 化驗結果臨牀意義
血清澱粉酶測定主要用於急性胰腺炎的診斷。一般於發病後6~12h開始
升高,12~24h達峯值,2~5天恢復正常,因此血清澱粉酶活性顯著升高對急性胰腺炎的早期診斷價值較大。尿澱粉酶於發病後12~24h開始升高,持續時間長,下降比血清澱粉酶慢,故胰腺炎後期測尿澱粉酶更有價值。慢性胰腺炎、胰腺癌、急性闌尾炎、潰瘍性穿孔、腸梗阻、流行性腮腺炎、唾液腺化膿等血清澱粉酶均可升高。腎功能障礙時,血澱粉酶升高,尿澱粉酶降低。各種肝病患者,血、尿澱粉酶常同時降低。
4.9 附註
①血清和肝素抗凝血漿結果一致,而EDTA-Na2、草酸鹽、枸櫞酸鹽、氟化鈉可抑制AMS活性,使結果偏低。
②酶活性顯著升高,即測定管吸光度小於空白管吸光度一半時,因底物相對不足,應將標本加大稀釋倍數,或減少標本加入量,測定結果乘以稀釋倍數。
③唾液中AMS活性很高,應防止進入。
④澱粉基質液如出現混濁或絮狀物,提示變質或受污染,應重新配製。
⑤碘液的濃度可影響測定結果,一般碘應用液超過1個月應重新配製。
①△A/min>0.15時,應將標本用生理鹽水稀釋10倍重測,測定結果乘以稀釋倍數。
②試劑盒、組分及方法不盡相同,應以說明書操作爲準。