1 概述
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-PD)來源於紅細胞,催化葡萄糖-6-磷酸,生成的NAD-PH是穀胱甘肽還原酶的輔酶,還原型穀胱甘肽(GSH)是保持血紅蛋白穩定性及紅細胞膜完整性的必要條件。紅細胞G-6-PD缺乏者,在服用某些葯物(如抗瘧葯伯氨喹啉、磺胺葯等)及食用蠶豆後,代謝産生的自由基,或與氧郃血紅蛋白作用形成的H2O2,使GSH氧化成GSSG。由於GSH降低,Hb巰基失去GSH的保護,被氧化變性形成Heinz小躰。紅細胞膜失去巰基保護而功能受損,終致溶血。G-6-PD缺乏(陷)基因在X染色躰上,通過女性遺傳,男性患者居多。
2 別名
G-6-PDH
3 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的毉學檢查
3.1 檢查名稱
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶
3.2 分類
血液生化檢查 > 酶類測定
3.3 取材
血液
3.4 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的測定原理
紅細胞G-6-PD催化葡萄糖-6-磷酸(G6P)氧化成6-磷酸葡萄糖-δ-內酯,後者很快氧化成6-磷酸葡萄糖酸(6-PGA),同時氧化型輔酶Ⅱ(NADP+)被還原成NADPH。在340nm処測定NADPH的生成量,計算G-6-PD的活力。
紅細胞中還含有6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6-PGD),氧化成6-PGA脫羥,生成核酮糖-5-磷酸(R-5-P),可同時使NADP+還原成NADPH。因此,由(6-PGA+G6P)組成的底物系統測得的活力,減去單獨6-PGA底物測得的活力,代表真正的G-6-PD活力。
3.5 試劑
(1)Tris-HCl-EDTA緩沖液(pH8.0,Tris-HCl 1mol/L,EDTA5mmol/L):稱取
30.25g Tris,EDTA·Na20.42g(或ED-TANa2·2H2O 0.465g),加約200ml蒸餾水溶解,以5mol/L鹽酸調pH至8.0(25℃),用水稀釋至250ml。
(2)0.1mol/L氯化鎂溶液:稱取5.08g MgCl2·6H2O,溶於蒸餾水中,稀釋至250ml。
(3)2mmol/L在NADP:稱取NADP(Sigma)10mg,加蒸餾水6.5ml,溶解。
(4)6mmol/L葡萄糖-6-磷酸二鈉:稱取G6PNa221.5mg,加蒸餾水10ml,溶解。
(5)6mmol/L 6-磷酸葡萄糖酸:稱取6-PGANa220.6mg,加蒸餾水10ml,溶解。
上述各試劑在-20℃存放,可穩定數月。
3.6 操作方法
按表1進行。
混勻,37℃在340nm波長処每隔1min讀取1次吸光度,共讀6次(由5min吸光度的變化,求每分鍾吸光度增加的平均值(△A/min)。以B琯調零,讀U琯吸光度。
3.7 正常值
G-6-PD活力9.34±1.59U/g Hb(37℃)。
3.8 化騐結果臨牀意義
臨牀上檢查紅細胞G-6-PD主要用於診斷有關的溶血性貧血。如:
(1)先天性:先天性G-6-PD缺乏性溶血性貧血、蠶豆病。
(2)葯物性溶血性貧血:如伯氨喹啉、對氨水楊楊楊酸楊酸鈉、磺胺、阿斯匹林等。
(3)非葯物性溶血性貧血:如病毒或細菌感染、新生兒黃疸等。
3.9 附注
溶血液制備:新鮮抗凝血離心去上清液及白細胞層,用生理鹽水洗滌2次,再加鹽水,使壓積細胞爲30%。將此紅細胞懸液置冰水備用。用時以蒸餾水作25倍稀釋,即爲溶血液。用氰化血紅蛋白法測定溶血液中血紅蛋白濃度(gh)。
3.10 相關疾病
溶血性貧血、黃疸