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自然殺傷細胞活性

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1 拼音

zì rán shā shāng xì bāo huó xìng

2 檢查名稱

自然殺傷細胞活性

3 分類

免疫學檢查/細胞免疫測定

4 概述

自然殺傷細胞又稱NK細胞,其主要的功能特征是對腫瘤細胞病毒感染細胞具有非特異性的殺傷力,這種殺傷效應不依賴抗體補體,體外檢測NK細胞活性是診斷NK細胞功能及其與某些疾病關系的一個重要手段。

5 原理

5-125碘-2'-脫氧尿嘧啶核苷125IUdR)分子上的碘原子胸腺嘧啶核苷上的甲基在空間構型上類似,作為DNA合成的前體物,125IUdR較特異的取代胸腺嘧啶核苷摻入到細胞核DNA鏈上。因此,可用于標記快速分裂的瘤細胞。當標記的腫瘤靶細胞被NK細胞攻擊死亡后,靶細胞內的125IUdR可釋放入培養液中,此釋放的同位素幾乎不再被活細胞利用。經用γ閃爍計數器測定cpm值,算出釋放率,以其釋放的百分率表示NK細胞的活性。

6 試劑

(1)淋巴細胞分層液、K562細胞株、5-FUdR和125IUdR、胰蛋白酶和DNA酶。

(2)效應細胞  靜脈血單個核細胞分離提取同K細胞測定方法,用RPMI 1640培養液洗滌2次,最后用該液配成1×107個/ml細胞懸液。

(3)標記靶細胞  用慢性骨髓白血病母細胞K562株作為靶細胞(此細胞可在液氮中長期貯存)。取一定量的靶細胞加入一定量的5-FUdR和125IU-dR,混勻置37℃培育2h,然后用培養液洗3次,配成1×105個/ml,檢測細胞標記率,要求2cpm/每個細胞。

7 操作方法

(1)效靶細胞作用:將分離好的淋巴細胞懸液(效應細胞)和標記的K562細胞(靶細胞)按100∶1的比例加入平底塑料試管中,按表1操作,同時設自然釋放管(作為對照管),每個標本作了3個復管,最后用培養液使每管增至1ml,1500r/min離心,促進效靶細胞結合,置37℃、5% CO2孵箱內孵育18h。

(2)酶促反應:取出孵育試管,棄去各管上清液,剩下的細胞加一定濃度(2.2g/L)胰蛋白酶和DNA酶各0.1m1,混勻后37℃水浴30min,促使被攻擊的靶細胞釋放125IUdR,隨后各管立即加入0.8ml Hank液終止酶促反應。混勻后1500r/min離心2min。

(3)測放射強度和計算:用γ型計數器分別測各管(上清和細胞管)cpm值,按下式計算;

8 正常值

自然釋放率要求<10%;自然殺傷率大約35%~85%,平均值60%。

9 化驗結果臨床意義

K細胞主要分布在腹腔滲出液,外周血、脾臟中;NK細胞主要分布在骨髓、外周血和脾臟中。臨床主要用于腫瘤、病毒感染、寄生蟲感染自身免疫移植免疫等病人,檢測其K、NK細胞殺傷功能,在維持和調節特異性免疫中起重要作用。

10 附注

(1)要求效/靶細胞比為100∶1,若比>100∶1,自然殺傷率不呈對數增加。且標本用量亦大。

(2)標記靶細胞放置時間不宜過久。因隨時間延長死細胞增加,自然釋放率欠準確。

(3)標記的125IUdR濃度要合適,要求125IUdR的放射性濃度為1.11×107Bq/ml,如濃度過低,標記率<0.1cpm細胞,檢測結果受影響。

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開放分類:化驗及醫學檢查免疫學檢查細胞免疫測定
詞條自然殺傷細胞活性banlang创建
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  • 評論總管
    2019/9/17 10:42:39 | #0
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