胰泌素

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    目錄
    1. 拼音
    2. 英文參考
    3. 概述
    4. 別名
    5. 胰泌素的醫學檢查
      1. 檢查名稱
      2. 分類
      3. 胰泌素的測定原理
      4. 試劑
      5. 操作方法
      6. 正常值
      7. 化驗結果臨床意義
      8. 附注
      9. 相關疾病

    拼音

    yí mì sù

    英文參考

    SEC

    secretin

    概述

    胰泌素(Secretin)是由十二指腸粘膜S細胞和分散在空腸(主要是上端)的S細胞釋放的消化激素(又稱促胰液素胰液素),胰泌素為一堿性多肽,由27個氨基酸組成,與抑胃肽,血管活性腸肽胰高血糖素的氨基酸序列分別有9、9、14個氨基酸序列完全相同。提示它們由同一激素祖先演化而來,故把這四個肽歸為一族,稱為胰泌素族。胰泌素主要由腎臟消除。胃酸刺激胰液素釋放的主要的生理作用最強的因素。刺激其釋放的pH閾值為4.5,其他如膽汁膽酸鈉脂肪、鈣離子酒精等均刺激胰液素升高。胰泌素具有如下生理作用:①強烈刺激胰臟外分泌腺分泌水和碳酸氫鈉。②刺激膽汁分泌。③抑制胃泌素釋放和胃酸分泌,抑制生長抑素的局部釋放。④抑制胃腸蠕動,并延緩胃液和固體食物的排空,增強膽囊收縮素膽囊收縮作用。

    別名

    促胰腺素

    胰泌素的醫學檢查

    檢查名稱

    胰泌素

    分類

    激素類測定 > 消化道激素測定

    胰泌素的測定原理

    本法是標記抗原(Ag·)和非標記抗原(Ag)對特異性抗體(Ab)的競爭抑制反應,其反應為Ag·+Ag+Ab(Ag·Ab)+(AgAb)。當Ag·和Ab的量保持恒定,Ag與Ag·之和大于Ab上的有效結合點的數目,在該條件下,Ag與Ag·間存在著函數關系,亦即隨著Ag濃度增加,Ag-Ab生成量多,而Ag·-Ab的數量則減少,游離的Ag·就增多。因為Ag·對Ab的結合,可因Ag競爭結合而遭抑制。反之,當Ag量少時,Ag-Ab生成量就少,Ag·-Ab量增多,而游離的Ag·減少(圖1)。將結合的抗原抗體復合物(B)與游離抗原(F)分離,分別測定B和F的放射活性,計算出B/F或B/B+F值,可制出B/F或B/B+p對Ag量的關系曲線圖。測定時,需用一系列已知濃度的Ag和一定量Ag·及相應抗體Ab混合,然后測出各標準濃度Ag參加下的Ag·-Ab放射結合率(B/B+F)或(B/F),繪出競爭抑制標準曲線(圖2)。試驗時,在同樣條件下,根據被測Ag的放射性結合率,從標準曲線上查知相應Ag含量。

    試劑

    (1)抗原的純化:試驗需用高純度的抗原。通常,蛋白質抗原的純度應達到電泳分析純,電泳后僅顯示單一區帶,并具有足夠或完整的免疫原性。一般先經聚丙烯酰胺電泳鑒定,再用等電聚焦SDS聚丙烯酰胺雙相電泳鑒定為單一區帶,然后用于免疫動物核素標記。

    純抗原因其溶液中缺乏其他蛋白質作穩定劑,或因貯存在純離子濃度的緩沖液中,故易形成聚合物,因此在純化抗原時需加注意。若采用聚合物抗原的標記,用于RIA中將會顯著增加非特異性結合,降低測定的靈敏度

    (2)抗原的標記方法:標記用的核素有γ射線和β射線兩大類。前者常用131I、125I、51Cr,后者多用3H、32P和14C。選擇放射性核素首先要考慮比放射性,比放射性愈高,參與反應的抗原化學量就愈小,測定方法的靈敏度相對就愈高。核放射性和半衰期要適宜,便于使用和防護。標記后的抗原要保持其免疫原性。標記技術要簡便、經濟。

    標記方法有直接標記和間接標記兩大類,以最常用的125I為例分述如下。

    ①直接標記:將125I直接結合于蛋白質側鏈殘基的酪氨酸上,步驟單一,操作簡便,標記物的比放射性較高,但此法僅能用于標記含酪氨酸的化合物,如所含的酪氨酸殘基為蛋白質的特異性和生物活性所必需,則該活性易因標記而失活。

    最常用的直接標記法為氯胺T標記法(簡稱h-T):氯胺T是對甲基苯磺基酰胺的N氯衍生物的鈉鹽,在水溶液中分解形成次氯酸成為一種氧化劑。在偏堿溶液中(pH值7.5)能使帶負電荷的125I離子(Na-125I)氧化成帶正電荷的125I離子,借以取代蛋白質酪氨酸苯環的氫,形成二碘酪氨酸。

    125I標記率的高低與抗原(蛋白質或多肽)分子中酪氨酸的含量及其在分子中的暴露程度有關。

    標記方法的原則是將純化抗原和125I加入小試管底部,繼將配制的氯胺T快速沖入,混勻振蕩1~2min后加入偏重亞硫酸鈉終止反應。再加碘化鉀溶液稀釋,然后在葡聚糖G50柱上分離,分別用井型閃爍計數器測定放射性強度(脈沖數/min、cpm),前部為標記抗原峰,后部為游離125I峰。在標記抗原峰試管中加等量1%白蛋白作為穩定劑即為標記抗原液。

    ②間接標記:是先將125I標記在載體上,純化后再與蛋白質或肽抗原結合,用N琥珀酰亞胺-3-[4-羥5-(125I)碘苯]丙酸鹽(NSHPP)作為間接標記試劑,該試劑的N琥珀酰亞胺基與多肽游離氨基縮合為結合物,使125I標記的苯基與蛋白質的氨基結合。

    本法先以氯胺T使125I接上NSHPP,由于在水溶液中它迅速水解為3-(4-羥苯基)丙酸,故在碘化反應中要盡快減少這種水解作用。這種碘標記物必須從水箱抽提到有機溶液中去,再除去有機溶劑后,使125I-NSHPP與蛋白質結合,制成125I-NSHPP-蛋白質標記物。

    本法可標記缺乏酪氨酸殘基的多肽,其最大優點是不損傷蛋白質的活性,能保存標記物高度的酶活性免疫活性,適合于對不穩定的蛋白質標記,缺點是操作復雜,標記率低。

    (3)標記抗原的鑒定:為保證放射免疫測定的質量,制備的標記物必需作如下鑒定:

    游離放射性碘的含量  用三氯乙酸將所有蛋白質沉淀,分別測定沉淀物和上清液的cpm值。一般要求游離碘占總放射性碘的5%以下。標記抗原貯存過久時,可出現標記物的解離,一旦超過5%則應廢棄。

    免疫活性  用小量標記抗原加過量抗體,反應后分離B和F,分別測定其放射性,算出百分結合率,此值應在80%以上,值越大,表示損傷抗原越少。

    放射強度  它是指單位重量抗原的放射強度,比放射性越高,測定越敏感。標記抗原的比放射性以125I的標記率或利用率表示。

    (4)抗體的制備和鑒定  RIA中所用的抗體應具有高親和力和高特異性,制備高價單相抗血清,最好以標記用的純化抗原免疫動物,制備半抗原的抗血清,需先將半抗原與載體結合,使成免疫原,常用的載體為牛血清白蛋白。

    抗血清同樣也要加以嚴格鑒定,包括其靈敏度、親和力和特異性。在固定量標記抗原與不同濃度的抗血清作用的條件下,測定B/F值,制得一條B/F值對不同稀釋度抗血清的曲線圖(圖3),該曲線的直線部分上段的斜率是抗體最大親和力的定性標志,也是靈敏度的標志。斜率越大,RIA靈敏度越高,在許多RIA反應系統中,呈最大靈敏度的抗體濃度為B/F=1。

    當采用固定量的抗體(Q0)與不同濃度的抗原作用時,以B/F對B作圖,所得曲線的斜率就是親和常數(Ka)的負數(圖4)。

    在RIA反應系統中,測定結構相似的不同物質時,可以鑒定抗體的特異性。

    操作方法

    本法分三個步驟,即抗原與抗體反應、B和F分離和放射性測定。

    (1)抗原與抗體反應:將標本(非標記抗原)、標記抗原和抗血清順序定量加入小試管內,置室溫(15~30℃)作用24h,使其充分競爭結合。

    (2)B、F分離:分離技術多種多樣,常用沉淀法。①第二抗體沉淀法:又稱雙抗體法,在受檢抗原與第一抗體特異性反應后加入相應的第二抗體,使形成的抗原-第一抗體-第二抗體的復合物共沉,一經離心即可使結合標記抗原B與游離抗原F分離。本法是特異性沉淀,分離完全,非特異性結合力低。但第二抗體用量較大,成本較高。此外血清濃度、抗凝劑的有無因素可在一定程度上影響結果。②聚乙二醇(PEG)沉淀法:使蛋白質處于等電點狀態,水化層破壞而導致蛋白質沉淀。本法優點是PEG制備方便、價廉、分離快速,缺點是非特異沉淀物較多,分離不完全。③第二抗體-聚乙二醇沉淀法:本法既有PEG法的快速沉淀優點,且保持第二抗體特異性沉淀的作用,又減少第二抗體用量,并降低PEG濃度,使非特異沉淀物減少。④活性炭吸附法:利用活性炭表面活性將小分子的游離部分吸附。如在活性炭表面涂上一層葡聚糖,使它表面具有一定孔徑的網眼,從而允許小分子游離抗原或半抗原逸入而被吸附,而大分子復合物則被排斥在外。在抗原與抗體反應后,加入葡聚糖-活性炭,放置5~10min,使游離抗原吸附在活性炭顆粒上,離心使顆粒沉淀,上清液中含有結合的標記抗原。

    (3)放射性強度測定:B和F分離后,即可測定其放射性強度。測量儀器有兩類:液體閃爍計數儀(測β射線)和晶體閃爍計數儀(測γ射線)。計數單位是探測器輸出的電脈沖數,單位為cpm(脈沖數/min)。

    每次測定均需作一標準曲線圖,以標準抗原的不同濃度為橫坐標,以測到的相應放射性強度為縱坐標作圖。放射性強度可任選B或F,亦可采用計算值B/B+F、B/F或B/B0。標本應作雙份測定,取其平均值,在標準曲線上查出相應的受檢抗原濃度。

    正常值

    (4.4±0.38)μg/L。

    化驗結果臨床意義

    (1)高胰泌素血癥:胃酸分泌增多的十二指腸潰瘍、卓-艾綜合征以及晚期腎功能衰竭這3種情況胰泌素水平明顯增高。胃酸分泌增多者胰泌素濃度為(6.9±0.64)pg/ml,卓-艾綜合征患者空腹血漿胰泌胰泌素水平可高于15pg/ml。

    (2)飲酒者(包括一般的飲量)可導致免疫活性的胰泌素的釋放增加。

    (3)胰泌素分泌不足,導致強堿性胰液不足以中和進入十二指腸的胃酸,形成潰瘍。故部分十二指腸潰瘍病人,胰液素分泌量少于正常。

    (4)乳糜瀉和“小腸粘膜結腸化”腸炎患者,空腸指狀絨毛消失,表面粘膜萎縮,腸粘膜中內分泌細胞功能減退,血中胰液素水平降低,不能刺激胰腺分泌大量的碳酸氫鹽,不能中和進入十二指腸的胃酸,故常伴空腸潰瘍

    附注

    胃泌素的釋放受迷走神經興奮影響,亦受食物刺激、胃幽門竇擴張、體液因素等因素興奮,胃腸內容物的PH值對胃泌素的釋放有很大影響。

    相關疾病

    十二指腸潰瘍

    乳糜瀉

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    詞條胰泌素banlang創建
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    • 評論總管
      2014-9-21 8:00:11 | #0
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