胰泌素

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    1 拼音

    yí mì sù

    2 英文參考

    SEC

    secretin

    3 概述

    胰泌素(Secretin)是由十二指腸粘膜S細胞和分散在空腸(主要是上端)的S細胞釋放的消化激素(又稱促胰液素胰液素),胰泌素為一堿性多肽,由27個氨基酸組成,與抑胃肽,血管活性腸肽胰高血糖素的氨基酸序列分別有9、9、14個氨基酸序列完全相同。提示它們由同一激素祖先演化而來,故把這四個肽歸為一族,稱為胰泌素族。胰泌素主要由腎臟消除。胃酸刺激胰液素釋放的主要的生理作用最強的因素。刺激其釋放的pH閾值為4.5,其他如膽汁膽酸鈉脂肪、鈣離子酒精等均刺激胰液素升高。胰泌素具有如下生理作用:①強烈刺激胰臟外分泌腺分泌水和碳酸氫鈉。②刺激膽汁分泌。③抑制胃泌素釋放和胃酸分泌,抑制生長抑素的局部釋放。④抑制胃腸蠕動,并延緩胃液和固體食物的排空,增強膽囊收縮素膽囊收縮作用。

    4 別名

    促胰腺素

    5 胰泌素的醫學檢查

    5.1 檢查名稱

    胰泌素

    5.2 分類

    激素類測定 > 消化道激素測定

    5.3 胰泌素的測定原理

    本法是標記抗原(Ag·)和非標記抗原(Ag)對特異性抗體(Ab)的競爭抑制反應,其反應為Ag·+Ag+Ab(Ag·Ab)+(AgAb)。當Ag·和Ab的量保持恒定,Ag與Ag·之和大于Ab上的有效結合點的數目,在該條件下,Ag與Ag·間存在著函數關系,亦即隨著Ag濃度增加,Ag-Ab生成量多,而Ag·-Ab的數量則減少,游離的Ag·就增多。因為Ag·對Ab的結合,可因Ag競爭結合而遭抑制。反之,當Ag量少時,Ag-Ab生成量就少,Ag·-Ab量增多,而游離的Ag·減少(圖1)。將結合的抗原抗體復合物(B)與游離抗原(F)分離,分別測定B和F的放射活性,計算出B/F或B/B+F值,可制出B/F或B/B+p對Ag量的關系曲線圖。測定時,需用一系列已知濃度的Ag和一定量Ag·及相應抗體Ab混合,然后測出各標準濃度Ag參加下的Ag·-Ab放射結合率(B/B+F)或(B/F),繪出競爭抑制標準曲線(圖2)。試驗時,在同樣條件下,根據被測Ag的放射性結合率,從標準曲線上查知相應Ag含量。

    5.4 試劑

    (1)抗原的純化:試驗需用高純度的抗原。通常,蛋白質抗原的純度應達到電泳分析純,電泳后僅顯示單一區帶,并具有足夠或完整的免疫原性。一般先經聚丙烯酰胺電泳鑒定,再用等電聚焦SDS聚丙烯酰胺雙相電泳鑒定為單一區帶,然后用于免疫動物核素標記。

    純抗原因其溶液中缺乏其他蛋白質作穩定劑,或因貯存在純離子濃度的緩沖液中,故易形成聚合物,因此在純化抗原時需加注意。若采用聚合物抗原的標記,用于RIA中將會顯著增加非特異性結合,降低測定的靈敏度

    (2)抗原的標記方法:標記用的核素有γ射線和β射線兩大類。前者常用131I、125I、51Cr,后者多用3H、32P和14C。選擇放射性核素首先要考慮比放射性,比放射性愈高,參與反應的抗原化學量就愈小,測定方法的靈敏度相對就愈高。核放射性和半衰期要適宜,便于使用和防護。標記后的抗原要保持其免疫原性。標記技術要簡便、經濟。

    標記方法有直接標記和間接標記兩大類,以最常用的125I為例分述如下。

    ①直接標記:將125I直接結合于蛋白質側鏈殘基的酪氨酸上,步驟單一,操作簡便,標記物的比放射性較高,但此法僅能用于標記含酪氨酸的化合物,如所含的酪氨酸殘基為蛋白質的特異性和生物活性所必需,則該活性易因標記而失活。

    最常用的直接標記法為氯胺T標記法(簡稱h-T):氯胺T是對甲基苯磺基酰胺的N氯衍生物的鈉鹽,在水溶液中分解形成次氯酸成為一種氧化劑。在偏堿溶液中(pH值7.5)能使帶負電荷的125I離子(Na-125I)氧化成帶正電荷的125I離子,借以取代蛋白質酪氨酸苯環的氫,形成二碘酪氨酸。

    125I標記率的高低與抗原(蛋白質或多肽)分子中酪氨酸的含量及其在分子中的暴露程度有關。

    標記方法的原則是將純化抗原和125I加入小試管底部,繼將配制的氯胺T快速沖入,混勻振蕩1~2min后加入偏重亞硫酸鈉終止反應。再加碘化鉀溶液稀釋,然后在葡聚糖G50柱上分離,分別用井型閃爍計數器測定放射性強度(脈沖數/min、cpm),前部為標記抗原峰,后部為游離125I峰。在標記抗原峰試管中加等量1%白蛋白作為穩定劑即為標記抗原液。

    ②間接標記:是先將125I標記在載體上,純化后再與蛋白質或肽抗原結合,用N琥珀酰亞胺-3-[4-羥5-(125I)碘苯]丙酸鹽(NSHPP)作為間接標記試劑,該試劑的N琥珀酰亞胺基與多肽游離氨基縮合為結合物,使125I標記的苯基與蛋白質的氨基結合。

    本法先以氯胺T使125I接上NSHPP,由于在水溶液中它迅速水解為3-(4-羥苯基)丙酸,故在碘化反應中要盡快減少這種水解作用。這種碘標記物必須從水箱抽提到有機溶液中去,再除去有機溶劑后,使125I-NSHPP與蛋白質結合,制成125I-NSHPP-蛋白質標記物。

    本法可標記缺乏酪氨酸殘基的多肽,其最大優點是不損傷蛋白質的活性,能保存標記物高度的酶活性免疫活性,適合于對不穩定的蛋白質標記,缺點是操作復雜,標記率低。

    (3)標記抗原的鑒定:為保證放射免疫測定的質量,制備的標記物必需作如下鑒定:

    游離放射性碘的含量  用三氯乙酸將所有蛋白質沉淀,分別測定沉淀物和上清液的cpm值。一般要求游離碘占總放射性碘的5%以下。標記抗原貯存過久時,可出現標記物的解離,一旦超過5%則應廢棄。

    免疫活性  用小量標記抗原加過量抗體,反應后分離B和F,分別測定其放射性,算出百分結合率,此值應在80%以上,值越大,表示損傷抗原越少。

    放射強度  它是指單位重量抗原的放射強度,比放射性越高,測定越敏感。標記抗原的比放射性以125I的標記率或利用率表示。

    (4)抗體的制備和鑒定  RIA中所用的抗體應具有高親和力和高特異性,制備高價單相抗血清,最好以標記用的純化抗原免疫動物,制備半抗原的抗血清,需先將半抗原與載體結合,使成免疫原,常用的載體為牛血清白蛋白。

    抗血清同樣也要加以嚴格鑒定,包括其靈敏度、親和力和特異性。在固定量標記抗原與不同濃度的抗血清作用的條件下,測定B/F值,制得一條B/F值對不同稀釋度抗血清的曲線圖(圖3),該曲線的直線部分上段的斜率是抗體最大親和力的定性標志,也是靈敏度的標志。斜率越大,RIA靈敏度越高,在許多RIA反應系統中,呈最大靈敏度的抗體濃度為B/F=1。

    當采用固定量的抗體(Q0)與不同濃度的抗原作用時,以B/F對B作圖,所得曲線的斜率就是親和常數(Ka)的負數(圖4)。

    在RIA反應系統中,測定結構相似的不同物質時,可以鑒定抗體的特異性。

    5.5 操作方法

    本法分三個步驟,即抗原與抗體反應、B和F分離和放射性測定。

    (1)抗原與抗體反應:將標本(非標記抗原)、標記抗原和抗血清順序定量加入小試管內,置室溫(15~30℃)作用24h,使其充分競爭結合。

    (2)B、F分離:分離技術多種多樣,常用沉淀法。①第二抗體沉淀法:又稱雙抗體法,在受檢抗原與第一抗體特異性反應后加入相應的第二抗體,使形成的抗原-第一抗體-第二抗體的復合物共沉,一經離心即可使結合標記抗原B與游離抗原F分離。本法是特異性沉淀,分離完全,非特異性結合力低。但第二抗體用量較大,成本較高。此外血清濃度、抗凝劑的有無因素可在一定程度上影響結果。②聚乙二醇(PEG)沉淀法:使蛋白質處于等電點狀態,水化層破壞而導致蛋白質沉淀。本法優點是PEG制備方便、價廉、分離快速,缺點是非特異沉淀物較多,分離不完全。③第二抗體-聚乙二醇沉淀法:本法既有PEG法的快速沉淀優點,且保持第二抗體特異性沉淀的作用,又減少第二抗體用量,并降低PEG濃度,使非特異沉淀物減少。④活性炭吸附法:利用活性炭表面活性將小分子的游離部分吸附。如在活性炭表面涂上一層葡聚糖,使它表面具有一定孔徑的網眼,從而允許小分子游離抗原或半抗原逸入而被吸附,而大分子復合物則被排斥在外。在抗原與抗體反應后,加入葡聚糖-活性炭,放置5~10min,使游離抗原吸附在活性炭顆粒上,離心使顆粒沉淀,上清液中含有結合的標記抗原。

    (3)放射性強度測定:B和F分離后,即可測定其放射性強度。測量儀器有兩類:液體閃爍計數儀(測β射線)和晶體閃爍計數儀(測γ射線)。計數單位是探測器輸出的電脈沖數,單位為cpm(脈沖數/min)。

    每次測定均需作一標準曲線圖,以標準抗原的不同濃度為橫坐標,以測到的相應放射性強度為縱坐標作圖。放射性強度可任選B或F,亦可采用計算值B/B+F、B/F或B/B0。標本應作雙份測定,取其平均值,在標準曲線上查出相應的受檢抗原濃度。

    5.6 正常值

    (4.4±0.38)μg/L。

    5.7 化驗結果臨床意義

    (1)高胰泌素血癥:胃酸分泌增多的十二指腸潰瘍、卓-艾綜合征以及晚期腎功能衰竭這3種情況胰泌素水平明顯增高。胃酸分泌增多者胰泌素濃度為(6.9±0.64)pg/ml,卓-艾綜合征患者空腹血漿胰泌胰泌素水平可高于15pg/ml。

    (2)飲酒者(包括一般的飲量)可導致免疫活性的胰泌素的釋放增加。

    (3)胰泌素分泌不足,導致強堿性胰液不足以中和進入十二指腸的胃酸,形成潰瘍。故部分十二指腸潰瘍病人,胰液素分泌量少于正常。

    (4)乳糜瀉和“小腸粘膜結腸化”腸炎患者,空腸指狀絨毛消失,表面粘膜萎縮,腸粘膜中內分泌細胞功能減退,血中胰液素水平降低,不能刺激胰腺分泌大量的碳酸氫鹽,不能中和進入十二指腸的胃酸,故常伴空腸潰瘍

    5.8 附注

    胃泌素的釋放受迷走神經興奮影響,亦受食物刺激、胃幽門竇擴張、體液因素等因素興奮,胃腸內容物的PH值對胃泌素的釋放有很大影響。

    5.9 相關疾病

    十二指腸潰瘍

    乳糜瀉

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    • 評論總管
      2014-10-25 23:13:50 | #0
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