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胰島素原

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1 拼音

yí dǎo sù yuán

2 英文參考

proinsulin

3 概述

人胰島素原(proinsulin)是胰島素的前體物質,由胰島素和C肽組成,具有雙重免疫活性,既可與胰島素抗抗體結合,又可與C肽抗體結合。胰島素原由胰島β細胞合成和分泌,主要在腎臟分解代謝。生理情況下,只有極少量的胰島素原釋放入血,在病理情況下,胰島β細胞釋放胰島素原增多,血中胰島素原水平升高。

4 胰島素原的醫學檢查

4.1 檢查名稱

胰島素原

4.2 分類

激素類測定 > 胰腺內分泌功能檢查

4.3 胰島素原的測定原理

將一定量的標記胰島素、抗胰島素抗抗抗體和各種已知量的胰島素標準品血漿樣品相混合,使之發生特異性結合。然后葡聚糖炭粉分離游離胰島素和結合的胰島素,測定葡聚糖炭粉的放射性。葡聚糖炭粉吸附的放射性隨標本中胰島素含量增加而增加。

4.4 試劑

(1)標記緩沖液(0.5mol/L磷酸鉀緩沖液,pH值7.5)。

(2)測定緩沖液(0.05mol/L磷酸鉀緩沖液,pH值7.5,含0.1%牛血白蛋白和0.1%疊氮鈉)。

(3)柱飽和緩沖液(0.05mol/L磷酸鉀緩沖液,pH值7.5,含2%牛血清白蛋白和0.1%疊氮鈉)。

(4)0.25%氯胺T:氯胺T 25mg溶于標記緩沖液10ml。

(5)0.25%偏焦亞硫酸鈉:偏焦亞硫酸鈉25mg溶于0.05mol/L磷酸緩沖液10ml(pH值7.5)中。

(6)2%碘化鉀溶液:碘化鉀200mg溶于水10ml。

(7)100μg/L胰島素溶液:以胰島素1mg溶于0.01mol/L鹽酸0.5ml中,使胰島素溶解,然后以標記緩沖液補至10ml。每管20μl分裝后,貯存于-20℃。

(8)胰島素標準液:以100mIU/L倍比稀釋,采用6個標準,即0,1.5625,3.125,6.25,12.5,25mIU/L。

(9)抗胰島素血清:以上述胰島素150μg懸浮手水0.5ml,然后加等量的福氏完全佐劑乳化,多點注射于豚鼠背部皮下,然后每隔1月加強免疫,共2~3次,每次75μg。每次注射后8~12天內可檢測血清中抗體滴度。

(10)葡聚糖覆蓋的炭粉懸浮液:活性炭5g懸浮于測定緩沖液100ml,葡聚糖(T-70,或者T-250)0.5g溶于測定緩沖液100ml,然后將兩種溶液混和。

(11)Na 125I 北京原子能研究所供應。

(12)葡聚糖凝膠G-50柱(10×0.9cm):預先以柱飽和緩沖液浸洗過夜,然后以測定緩沖液平衡

4.5 操作方法

(1)胰島素碘標記物制備和純化:

①取Na 125I 3.7×107Bq置于含胰島素2μg(20μl)的反應管內。

②加氯胺T溶液10μl。

③立即蓋緊,輕敲小管使試劑快速混和。

④12~15s后,加偏焦亞硫酸鈉溶液25μl(62.5μg)。

⑤把管內容物加至Sephadex G-50柱上,用測定緩沖液洗滌,每管0.5ml收集45管,再用γ計數器計數。第一峰為125I標記的活性胰島素,第二峰是沒有結合的放射性碘。

(2)標記激素的免疫反應性估價:取第一峰收集物,以測定緩沖液稀釋至5000cpm/0.1ml,取0.1ml該標記物于小試管中,加入過量抗血清(0.1ml)及0.1ml測定緩沖液,在4℃溫育24h,然后加1ml葡聚糖活性炭懸浮液,在適當攪拌后,試管在4℃靜止15min,然后再離心15min,丟棄上清液,計數沉淀,沉淀計數應少于加入量的5%,如計數增加,指示125I-胰島素破壞。

(3)抗血清滴定:將抗血清系列稀釋,從1∶320000至1∶10 000測定時,在小試管中加0.1ml測定緩沖液,0.1ml稀釋的抗血清,0.1ml稀釋的標記胰島素。在4℃溫育20h,然后加1ml葡聚糖活性炭,適當攪拌后,在4℃溫育15min后,再離心15min。丟棄上清液,測量沉淀物放射性計數,計數以加入量(F/T%)的35%~60%為合適的抗體稀釋度。

(4)胰島素測定:標準管與測定管做雙份,具體操作如下表(表1):

4.6 正常值

各實驗室依具體情況確定。

放射免疫法:<0.2μg/L。

4.7 化驗結果臨床意義

(1)糖尿病患者血漿胰島胰島素胰島素原水平明顯升高。1型糖尿病由于胰島胰島素合成和分泌極度下降,剛合成的胰島素原在未轉變為胰島素的情況下即釋放入血,造成血漿胰島胰島素胰島素原升高。研究證明,部分表現為高胰島素血癥的2型糖尿病患者其實為高胰島素原血癥,是因為胰島β細胞功能障礙,胰島素原分泌增多所致。

(2)胰島β細胞瘤、家族性高胰島素血癥患者血漿胰島胰島素胰島素原水平明顯升高。

(3)慢性腎功能不全時,胰島素原的分解代謝降低,可致血漿胰島胰島素胰島素原升高;甲亢時亦可出現血漿胰島胰島素胰島素原水平升高。

4.8 附注

(1)在操作過程中加量務必精確。

(2)碘化鉀、氯胺T及偏焦亞硫酸鈉溶液在使用前幾分鐘配制。其他溶液可于-20℃貯存。

(3)加入葡聚糖活性炭后,在4℃靜置15min,不要延長時間或升高溫度,否則會導致沉淀計數增加。

(4)如市上有胰島素放免試劑盒出售,可省略抗胰島素抗血清制備,胰島素標記等步驟,操作方法須嚴格按照試劑盒所附說明書進行。

4.9 相關疾病

糖尿病、1型糖尿病、2型糖尿病

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開放分類:化驗及醫學檢查胰腺內分泌功能檢查激素類測定
詞條胰島素原banlang创建
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  • 評論總管
    2019/6/27 2:01:23 | #0
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