血型物質檢測

醫療技術名

1 拼音

xuè xíng wù zhì jiǎn cè

2 註解

3 操作名稱

血型物質檢測

4 用品及準備

5%A、B、O和Le(a+b-)紅細胞懸液,與待檢者相同,標化的抗A抗B、抗H、抗Lea血清,已知的分泌型和非分泌型唾液,其A、B、O型與待檢者相同。燒杯或粗口試管、煮鍋等,其他材料同ABO血型鑑定

5 方法及內容

5.1 唾液的留取

①將自然流出的唾液5—10ml盛入乾燥清潔的容器(小燒杯、三角瓶或粗口試管等)內,在水浴中煮沸10min(以滅活能使血型物質不活化的唾液酶,同時也破壞常見存在於唾液中的抗A抗B)。②以3000r/min離心10min,留取上清液備用,棄去不透明的半固態物質。

5.2 試劑血清修正液的製備

①取小試管分成4排,每排5支,分別標明第1排A1~A5,第2排B1~B5,第3排H1~H5,第4排Lea1~Lea5。②各排從第2管開始,每管加生理鹽水0.1ml。③第1—4排的第1和第2管分別加抗A抗B、抗H及抗Lea血清0.1ml,從第2管開始倍量稀釋。④於第1排各管加2%-5%的A型紅細胞鹽水懸液0.1ml;第2排各管加2%-5%的B型紅細胞鹽水懸液0.1ml;第3排各管加2%-5%的O型紅細胞鹽水懸液0.1ml;第4排各管加2%-5%的Le(a+b-)紅細胞鹽水懸液0.1ml。⑤振搖試管架使之混勻,置室溫lh後觀察結果。每排以出現"4+”凝集的最高稀釋度爲最適稀釋度。

5.3 唾液血型物質的檢測

(1)準備唾液陽性陰性對照。對ABH分泌者,使用已知Se(分泌型)和sese(非分泌型)人的唾液。對Lewis分泌者,使用Lea陽性和Lea陰性人的唾液。可以用對紅細胞試驗的結果來選擇這些對照。陽性對照應該有Le(a+b-)紅細胞陰性對照應該有Le(a-b-)紅細胞。試劑對照用生理鹽水。

(2)取4支試管,對ABH試驗分別標明待檢者、分泌型、非分泌型和生理鹽水。對Lewis試驗分別標明待檢者、Lewis陽性、Lewis陰性和生理鹽水。

(3)按標記分別加入最適稀釋度抗血清1滴。

(4)在相應的試管中加入唾液1滴,在對照管中加入生理鹽水1滴。

(5)混合後在室溫孵育30min,中和抗體。

(6)每管中加入5%已洗滌並與抗體相對應的紅細胞懸液1滴。

(7)混合後置室溫孵育1h或15min後,以3000r/min離心15s,觀察結果。

結果判讀:先看對照,分泌型對照應不凝集,非分泌型應凝集。待檢者若不凝集爲分泌型,凝集爲非分泌型。Lewis試驗,先看對照,陽性對照應不凝集陰性對照凝集。待檢者不凝集陽性凝集者爲Lea陰性

5.4 血型物質效價測定

(1)取小試管10支,依次編號。第2~10管各加入生理鹽水0.1ml。

(2)第1、2管各加入待檢者唾液0.1ml,從第2管開始倍比稀釋,第10管爲對照管。

(3)每管加相應的經修正過的試劑血清(待檢者爲A型,則用抗AB型抗BO型用抗H;AB型抗A抗B;Lea+用抗Lea0.1ml,混勻後,置室溫(20℃)30min。

(4)每管再加入與待檢者同型的5%紅細胞懸液一滴,混合後放置室溫(20℃)1h,觀察結果。

(5)結果判讀:先看對照的第10管,然後依次看1—9管,以抑制紅細胞凝集的最後一管的稀釋倍數爲該唾液血型物質的效價。

(6)注意事項:①漱口後留取唾液,以免食物殘渣混入;②爲增加唾液分泌,待檢者可嚼蠟、石蠟膜或橡皮條,但不能嚼口香糖或其他含糖或蛋白質的食品;③如果當日試驗用,血型物質可置4℃冰箱保存;如果暫時不用,可置低溫冰箱冰凍保存,可保留其活性幾年;④每次試驗最好備有分泌型和非分泌型唾液作對照。

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