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血清乳酸脫氫酶

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1 拼音

xuè qīng rǔ suān tuō qīng méi

2 英文參考

Lactic Dehydrogenase

3 概述

乳酸脫氫酶(LDH或LD)是糖無氧酵解及糖異生的重要酶系之一,可催化丙酮酸與L-乳酸之間的還原與氧化反應,也可催化相關的α-酮酸。LDH廣泛存在于人體組織中,以心、腎、骨骼肌含量最高,肝、脾、胰和肺組織次之,各組織的細胞漿內該酶活力血清的500~1000倍,紅細胞酶活性為血清的100倍。LDH測定方法主要有比色法和連續監測法。

4 血清乳酸脫氫酶醫學檢查

4.1 分類

血液生化檢查 > 酶類測定

4.2 取材

血液

4.3 原理

(1)比色法:LDH以NAD作氫的受體,催化乳酸脫氫,生成丙酮酸,后者與2,4-二硝基苯作用,生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液呈紅色,根據顏色深淺求出酶活性。

(2)連續監測法:LDH可催化L-乳酸生成丙酮酸,同時NAD還原成NADH,在340nm處吸光度的增高速率與酶活力成正比。

4.4 試劑

(1)比色法:

①底物緩沖液(含0.3mol/L乳酸鋰,pH8.8):取乳酸鋰2.88g,二乙醇胺2.1g,加蒸餾水約80ml溶解,以1mol/L HCl調pH8.8,加水至100ml。

②11.3mmol/L輔酶Ⅰ(NAD)溶液:稱氧化型輔酶Ⅰ 15mg,溶于20ml蒸餾水中,冰箱保存可用2周。

③1mmol/L 2,4-二硝基苯肼(DNPH)溶液:稱取DNPH 200mg,加10mol/L HCl 100ml,溶后加水至1000ml,置棕色瓶內室溫保存。

④0.4mol/L NaOH溶液。

⑤1mmol/L丙酮酸標準液:稱取丙酮酸鈉(AR級)11.0mg,以底物緩沖液溶解并稀釋至100ml,臨用前配制。

(2)連續監測法:

①55mmol/L乳酸鋰Tris緩沖液:稱取乳酸鋰5.28g,Tris 6.68g,溶于800ml蒸餾水中,在37℃水浴箱中用1mol/L HCl調pH至8.9(約需46ml),加水至1000ml,冰箱保存。

②12mmol/L NAD溶液:稱取NAD 79.6mg,溶于10ml蒸餾水中,冰箱保存可用2周。

基質應用液(含NAD 6mmol/L):根據當天用量將上述NAD溶液和乳酸鉀Tris緩沖液等量混合即可。商品試劑盒按其說明溶解,恢復至室溫25℃使用。

4.5 操作方法

(1)比色法:按表1操作。

混勻,室溫放置5min后,在440nm波長,比色杯光徑1.0cm,蒸餾水調零點,讀取各管吸光度,以AU-AC之差值查標準曲線,求出LDH活力單位。

附注:

①乳酸鉀、乳酸鈉也可作為LDH底物,但因其為水溶液,含量不夠準確,且保存不當易產生酮酸類物質,抑制酶促反應。而乳酸鋰為固體,穩定,易于稱量。

②除二乙醇胺緩沖液外,也可用Tris或焦磷酸緩沖液,避免了原金氏法中甘氨酸緩沖液對LDH的抑制作用,提高了陽性檢出率。

③比色應在5~15min內完成,否則吸光度降低。

④結果>2500U時,可用生理鹽水稀釋標本后再測,其結果乘以稀釋倍數。

(2)連續監測法:各實驗室可根據本室生化自動儀型號及說明書操作。主要參數為340nm波長,37℃,吸樣量500μl,連續監測時間60s,標本與試劑體積之比為1∶50。

附注:

①標本勿溶血,當溶血達Hb 0.8g/L時,LDH活性可升高58%。

②標本于室溫(25℃)保存,2天內酶活性穩定,冰箱保存酶活性降低,-20℃過夜LDH3、LDH4則全部失活。

③用血清或肝素凝血漿測定結果滿意,草酸鹽可抑制LDH活性。

④復溶后溶液變濁或初始吸光度>0.5應棄去。

⑤利用正逆雙向反應均可測定乳酸脫氫酶活性,但因反應溫度、底物和緩沖液濃度不同,其參考區間也有差異。以乳酸和NAD為底物,在340nm監測吸光度增高速率為正向反應,以LD-L表示;以丙酮酸和NADH為底物,監測340nm吸光度下降速率為逆向反應,以LD-P表示。正逆反應兩法相比,LD-L法的主要優點是:A.正向反應底物液的穩定性比逆向反應的穩定性大,前者冰箱可保存6個月以上,而后者僅幾天;B.速率反應的線性范圍(吸光度對監測時間t作圖)較寬;C.重復性比LD-P好。由于逆向反應速度比正向反應速度快,其參考值約為LD-L的2倍。

4.6 正常值

(1)比色法:150~450U/L。

(2)連續監測法:男80~280U/L

女100~230U/L

4.7 臨床意義

LDH測定常用診斷心肌梗死肝病和某些惡性腫瘤

(1)心肌梗死:發病10~12h升高,24~48h達高峰,8~9天后恢復正常。與CK相比,雖然酶活性出現較遲,陽性率較低,但持續時間長,且活性增高的程度與心肌梗死的病情密切相關,梗死范圍越大,其酶活性越高。若LDH增高后恢復遲緩,或在病程中再次增高,提示梗死范圍擴大,預后不良。

(2)肝臟疾病:急性肝炎或慢性活動性肝炎LDH常顯著或中度升高。其敏感度略低于ALT肝癌時LDH活性明顯升高,尤其是轉移性肝癌增高更顯著。可達1000U/L。

(3)血液病白血病、巨幼紅細胞貧血惡性淋巴瘤等LDH活性升高。

(4)其他:營養不良橫紋損傷胰腺炎、肺梗塞等LDH活性也升高。

4.8 相關疾病

惡性淋巴瘤     肝癌     轉移性肝癌

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參與討論
  • apple
    2015/3/14 20:07:28 | #1
    LDH催化的逆向反應速度非常慢,基本看不到NADH吸光值的增加。為什么?
    其實這個酶的名稱,名不副實。應該改名為丙酮酸還原酶。
    歡迎有一定酶學基礎和生化基礎的人員與本人交流LDH。
抱歉,功能升級中,暫停討論
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本頁最后修訂于 2013年2月23日 星期六 17:40:29 (GMT+08:00)
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