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血清肌紅蛋白

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1 拼音

xuè qīng jī hóng dàn bái

2 英文參考

serum myoglobin

SMb

3 概述

血清肌紅蛋白(Mb)存在于心肌與其他肌肉組織中,其分子量為17500D,Mb是急性心肌梗死AMI)病人升高的最早標志物之一,2~4h血中濃度就可以升高,6~10h幾乎所有AMI患者Mb都升高,因此Mb陽性特別有助于早期AMI的診斷。Mb很快從血中清除,在發病24h內可恢復到正常,所以Mb陰性特別有助排除AMI病程中觀察有無梗死擴展。Mb測定方法RIAELISA免疫比濁法等,但由于Mb在AMI診斷中為急診項目,近年來出現多種適合急診的技術,其中免疫比濁法能在10min內完成測定。

4 血清肌紅蛋白的醫學檢查

4.1 檢查名稱

血清肌紅蛋白

4.2 分類

血液生化檢查 > 蛋白質測定

4.3 取材

血液

4.4 血清肌紅蛋白的測定原理

(1)ELISA法樣品中的Mb和酶標Mb與Mb抗體競爭結合,酶標Mb-Mb抗體復合物中的辣根過氧化物作用于底物(OPD-H2O2)產生有色物質,顏色深淺與樣品中Mb濃度成反比,查半對數坐標曲線即得樣品Mb濃度。

(2)RIA法:血清中的Mb和125Ⅰ-Mb在緩沖液中共同競爭性的與抗體結合。加入PR分離劑,125Ⅰ-Mb-抗體復合物和抗兔IgG結合而沉淀,經離心分離,測沉淀物的放射性,計算各標準濃度點的B/B0%。從標準曲線上可得出血清中Mb濃度。

4.5 試劑

(1)ELISA法:

①PB溶液:0.02mol/L PB,PH7.2。

②1%正常兔血清:用含有0.2%戊二醛的PB溶液將正常兔血清稀釋成1%。

③4%正常人血清:用含有0.1g/L硫柳汞的PB溶液把正常人血清稀釋成4%。

包被液:用含有0.2%戊二醛的PB溶液把Mb抗體配成30μg/mL。

洗滌液:配成含有0.05% Tween20的PB溶液。

⑥稀釋液:牛血白蛋白用含有0.1g/L硫柳汞的PB溶液配成1g/L。

⑦底物溶液:取鄰苯二胺40mg加入pH5.0磷酸鹽-檸檬酸緩沖液(0.1mol/L檸檬酸24.3ml,加0.2mol/L Na2HPO4 25.7ml混合)至100ml,臨用前加H2O20.15ml。

⑧酶標Mb溶液:用稀釋液把干燥酶標Mb配成200ng/ml。

⑨標準Mb:酶標Mb和Mb抗體有商品供應。

(2)RIA法:

①50mmol/L pH7.4PBS。

抗血清:取經提取,純化和鑒定的人Mb,按每只新西蘭兔1mg于1ml蒸餾水中,加1ml福氏完全佐劑乳化,按常規方法免疫獲得抗血清。滴度可達1∶30000,和血清中蛋白質及Hb無交叉反應。按可供測100管量分裝,冷凍干燥,用前加10.5ml PBS溶解

125Ⅰ-Mb取高純度的人Mb10μg/10μl,采用Bolten-Hunter聯接法標記125Ⅰ。測定免疫活性,分裝每瓶74KBq(2μCi),冷凍干燥。用前加11mlPBS溶解。

④標準人Mb濃度:取人Mb液,用正常羊血清或20g/L BSA稀釋成25、50、100、200μg/L,分裝每瓶0.5ml,冷凍干燥。用前加0.5ml蒸餾水溶解。

⑤PR試劑:用驢抗兔IgG抗血清制備。

4.6 操作方法

(1)ELISA法:取一清潔干燥聚丙乙烯微孔反應板,標明空白、標準和測定,按以下步驟進行:

①空白對照孔加入200μl%正常兔血清,其余孔各加入200μl包被液(內含Mb抗體),37℃放置30min,再置4℃過夜,棄去上層液,用洗滌液洗3次,每次放室溫3min。

②空白對照孔加入100μl14%正常人血清;標準孔各加入5、10、20、40、80、160、320ng/ml的標準Mb溶液(用稀釋液配成)20μl,再加入4%正常人血清,測定孔加入20μl樣品血清,再加入4%正常人血清8μl。每孔各加入100μl酶標Mb溶液,置37℃1h,棄去溶液,用洗滌液洗3次。

③每孔各加入200μl底物溶液,37℃15min(避光顯色)。

④每孔加入2mol/L H2SO4以終止反應,振蕩1min,放置室溫10min,以空白對照孔調零,在492nm處讀取各孔吸光度。

(2)RIA法:

①取10×75mm塑料試管,零標準管加20g/L BSA液0.1ml,標準管(S1~4)加標準液0.1ml,測定管加待測血清0.1ml。每管各加抗血清0.1ml,混合后放37℃,水浴中20min。

②每管各加125Ⅰ-Mb液0.1ml,混合,放37℃水浴中20min,再向各管加PR試劑0.5ml,繼續放37℃水浴中30min。

③離心(3500r/min)15min。棄去上清液,在自動γ免疫計數器上測放射性。

④以B/B0%為縱坐標,相對應的標準Mb濃度為橫坐標,繪制標準曲線。根據樣品管的B/B0%,從標準曲線上查得樣品中Mb濃度。

4.7 正常值

(1)ELISA法:3.5~22.8ng/ml。

(2)RIA法:健康成人血清29±16.3μg/L。

4.8 化驗結果臨床意義

(1)測定血清中的Mb是早期診斷急性心肌梗死的敏感指標;從胸痛發作后12h取血,血清Mb就出現升高,此時CKAST正常。發病24h達高峰。

(2)心臟外科手術病人血清Mb升高,可以作為判斷心肌損傷程度及愈合情況的一個重要客觀指標。

(3)在臨床肌病研究中發現假性肥大型肌營養不良病人血清Mb升高;最高可達1150μg/L。

(4)急性或慢性腎功能不全、嚴重的充血性心力衰竭等也升高。

4.9 附注

劇烈運動、肌內注射、肌肉創傷、心導管術等。也可使肌紅蛋白升高。

4.10 相關疾病

急性心肌梗死、充血性心力衰竭

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開放分類:血液生化檢查化驗及醫學檢查蛋白質測定
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  • 評論總管
    2019/10/21 23:34:56 | #0
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本頁最后修訂于 2013年2月24日 星期日 10:41:09 (GMT+08:00)
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