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血清蛋白電泳

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1 拼音

xuè qīng dàn bái diàn yǒng

2 英文參考

serum protein electrophoresis

SPE

SPEP

3 概述

蛋白質等生物分子緩沖液中帶負電荷或正電荷,在電場中向陽極或陰極運動,稱為電泳(electmphomsis)。由于其等電點不同,分子大小形狀和荷質比的不同,使不同蛋白質分子具有不同的電泳遷移率,在一定的支持介質中可借以分離各種蛋白質。常用的電泳技術有:醋酸纖維素薄膜電泳、瓊脂凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳免疫電泳等。血清蛋白電泳以醋酸纖維素薄膜應用最為普遍。

4 血清蛋白電泳的別名

SPE

5 血清蛋白電泳的醫學檢查

5.1 檢查名稱

血清蛋白電泳

5.2 分類

血液生化檢查 > 蛋白質測定

5.3 取材

血液

5.4 血清蛋白電泳的測定原理

血清中各種蛋白質都有其特有的等電點,各種蛋白質在各自的等電點時呈電中性狀態,它的分子所帶正電荷與所帶負電荷量相等。將蛋白質置于pH比值等電點較高的緩沖液中,它們將形成帶負電荷的質點,在電場中均向正極泳動。由于血清蛋白質的等電點不同,帶電荷的量多少差異,蛋白質分子量大小也不同,所以在同一電場中泳動速度也不同。蛋白質分子越小帶電越多,移動速度越快;分子越大而帶電越少,移動速度越慢。按其泳動速度可以分出以下的主要區帶,從正極端起,依次為白蛋白、α1球蛋白和α2球蛋白,β球蛋白和γ球蛋白5條區帶。

5.5 試劑

(1)巴比妥-巴比妥鈉緩沖液(pH8.6±0.1、μ=0.06):以巴比妥2.21g、巴比妥鈉12.36g于500ml蒸餾水中,加熱溶解,待冷卻至室溫后加蒸餾水至1000ml。

(2)染色液:

①麗春紅S染色液:麗春紅9.04g、三氯醋酸6g,用蒸餾水溶解,并稀釋至100ml。

氨基黑10B染色液:氨基黑10B 0.1g,溶于無水乙醇20ml中,加冰醋酸5ml甘油0.5ml使溶解。然后將磺柳酸2.5 g,溶于少量蒸餾水中,加入前液,再以蒸餾水補足至100ml。

(3)漂洗液:

①30ml/L醋酸溶液:用于麗春紅染色的漂洗。

甲醇45ml,冰醋酸5ml和蒸餾水50ml混勻。用于氨基黑10B染色的漂洗。

(4)透明液:檸檬酸(C6H5Na3O7·2H2O)21g和N-甲基-吡咯烷酮150g,用蒸餾水溶解,并稀釋到500ml。亦可選用氫萘或液體石蠟透明。

(5)0.4mol/L氫氧化鈉溶液或0.1mol/L氫氧化鈉溶液。

5.6 操作方法

(1)將緩沖液加入電泳槽內,調節兩側槽內的緩沖液,使其處于同一平面。

(2)醋酸纖維素薄膜的準備:取醋酸纖維素薄膜(2cm×8cm)在毛面的一端(負極側)1.5cm處用鉛筆輕劃一橫線,做點樣標記。編號,并標明正、負極后,將薄膜置于巴比妥-巴比妥鈉緩沖液中浸泡,待充分浸透后(一般為20min)取出,夾于潔凈濾紙中間吸去多余的緩沖液。

(3)將醋酸纖維素薄膜毛面向上貼于電泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取無溶血血清3~5μl于橫線處沿橫線加樣,樣品應與薄膜的邊緣保持一定的距離,以免電泳圖譜中的蛋白區帶變形,待血清滲入薄膜后,反轉薄膜,使光面朝上,平直地貼于電泳槽支架上,用雙層濾紙或四層紗布將薄膜的兩端與緩沖液連通,稍待片刻。

(4)接通電源,注意醋酸纖維素薄膜上的正、負極,切勿接錯。電壓90~150v,電流0.4~0.6mA/cm(不同的電泳儀所需電壓,電流可能不同,應靈活掌握),夏季通電45min,冬季通電時間稍長,約為60min,電泳區帶展開約25~35mm即可。

(5)染色:通電完畢,取下薄膜直接浸于麗春紅S染液或氨基黑10B染色液中,染色5~10min(以白蛋白區帶染透為止),然后在漂洗液中漂去剩余染料,直至背景無色為止。

(6)定量:

比色法:將漂洗的薄膜吸干,剪下各染色的蛋白區帶入相應的試管中,在白蛋白管中加0.4mol/L氫氧化鈉6ml(計算時吸光度乘以2),其余各管加3ml,振搖數次,置37℃水箱20min使其色澤浸出。氨基黑10B染色用分光光度計在620nm處讀取各管吸光度,然后計算出各管的含量(同時做空白管對照)。

麗春紅S染色時浸出液用0.1mol/L氫氧化鈉,加入量同上法。10min后,白蛋白管內加400ml/L醋酸0.6ml(計算吸光度時乘以2),其余各管加0.3ml,以中和部分氫氧化鈉,使色澤加深,必要時離心,取上清液用分光光度計在520nm處讀取各管的吸光度(同時作空白對照),然后計算各自的含量。

光密度計掃描法:A.透明:吸去薄膜上的漂洗液(為防止透明液被稀釋影響透明結果),將薄膜浸入透明液中2~3min,然后取出,以滾動的方式平貼于潔凈無劃痕的載物玻璃片上(切勿產生氣泡),將此玻片豎立片刻,除去多余透明液后,置于恒溫90℃至100℃的烘箱內,烘烤10~15min,取出冷卻至室溫,用此法透明的各蛋白區帶鮮明,薄膜平整,可供直接掃描和永久保存(用氫萘或液體石蠟透明,應將漂洗過的薄膜烘干后進行透明,此法透明的薄膜不能存久,且易發生皺折)。B.掃描定量:將已透明的薄膜放入全自動光密度計或其他光密度計暗箱內,進行掃描分析

5.7 正常值

醋酸纖維素膜電泳法:白蛋白0.61~0.71(61%~71%)、α1球蛋白0.03~0.04(3%~4%),α2球蛋白0.06~0.10(6%~10%),β球蛋白0.07~0.11(7%~11%),γ球蛋白0.09~0.18(9%~18%)。

5.8 化驗結果臨床意義

(1)白蛋白減少:見于慢性肝炎肝硬化肝癌等。

(2)α1球蛋白(糖蛋白)增高:見于原發性肝癌。在重型肝炎、肝硬化、肝昏迷時則減少,與白蛋白呈正相關肝病時測定α1球蛋白對判斷肝炎的嚴重程度和預后有參考價值。一般情況下,α1球蛋白增加示病情較輕,α1球蛋白減少則提示病情較重,在嚴重肝功能衰竭時,其血清含量可顯著降低。

(3)α2球蛋白:病毒性肝炎初期無明顯變化,一周后逐漸增加,亞急性肝炎和急性肝壞死、失代償期肝硬化則減少。

(4)β球蛋白增高:見于脂肪肝高脂血癥腎病綜合征糖尿病合并高膽固醇血癥、梗阻性黃疸惡性腫瘤。在膽汁淤積性肝病時其含量升高,與α2球蛋白升高相平行。降低于見于急、慢性肝炎,肝硬化,尤以失代償期肝硬化和壞死肝硬化下降最為顯著。

(5)γ球蛋白增高:見于慢性肝炎、肝硬化、肝膽疾患。典型肝硬化尚可見β和γ帶相融合,形成β-γ橋。肝病患者γ球蛋白的變化可反映病情的嚴重程度。隨病情好轉,其含量可逐漸降至正常,如一直在高水平持續不降,提示病情嚴重,預后不良,并有向慢性肝炎及肝硬化發展的趨勢。此外,感染血吸蟲病多發性骨髓瘤結締組織病等也可升高。降低見于丙種球蛋白缺乏癥、部分化療患者等。

另外,多發性骨髓瘤在β球蛋白區帶與γ球蛋白區帶之間常出現M球蛋白帶;雙白蛋白血癥可見雙條白蛋白區帶。

5.9 附注

(1)每次電泳時應交換電極,可使兩側電泳槽內緩沖液的正、負離子互交換,從而使緩沖液保持在一定的pH水平,然而,每次電泳時薄膜數量不同,故緩沖液在使用10次后,最好棄去,重新配制,否則影響電泳效果。

(2)電泳槽內緩沖液高度保持一定,過低會出γ球蛋白的電滲現象(向陰極移動)。同時,電泳槽兩側液面應保持水平一致,否則通過薄膜時有虹吸現象,將會影響蛋白質分子的泳動速度。

(3)電泳失敗的原因:

①電泳圖譜不整齊:常見于點樣不均勻,位置不佳,薄膜尚未干燥水分蒸發,緩沖液變質,電泳時薄膜位置放置不正確,使電流方向不平行等。

②蛋白組分分離不佳:如點樣過多,電流過低,薄膜結構過分細致,透水性差,導電差等。

③白蛋白結果偏低:見于染色時間不足,染色液陳舊,不透明直接掃描等。

④薄膜透明不完全:見于溫度未達到90℃以上將標本放入烘箱,透明液時間過長或薄膜的浸泡時間不足等。

⑤透明膜上有氣泡:見于玻璃片不干凈(油脂、污垢等)使薄膜部分與其脫開,貼膜時操作不慎將氣泡裹入等。

(4)點加樣本時,一定要注意薄膜的毛面和光面,將樣本點在毛面上。

(5)放置薄膜時,要注意其正、負極,切勿接錯。

5.10 相關疾病

肝硬化、原發性肝癌、昏迷、脂肪肝、高脂血癥、腎病綜合征、糖尿病、黃疸、多發性骨髓瘤

相關文獻

開放分類:血液生化檢查化驗及醫學檢查蛋白質測定
詞條血清蛋白電泳ababab创建
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  • 評論總管
    2021/1/21 4:00:53 | #0
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本頁最后修訂于 2013年2月24日 星期日 11:15:31 (GMT+08:00)
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