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血清丙氨酸氨基轉移酶同工酶

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1 拼音

xuè qīng bǐng ān suān ān jī zhuǎn yí méi tóng gōng méi

2 概述

丙氨酸氨基轉移酶(Alanine aminotransferase,ALT),又稱谷丙轉氨酶(GPT),主要存在于各種組織細胞中,以肝細胞中含量最多。正常時,只有極少量釋放入血液中,故血清酶活性很低。各種肝炎的急性期,藥物中毒性肝細胞性壞死等疾病時,肝細胞酶大量釋放入血中,使血清ALT活性顯著增高,因此它是診斷病毒性肝炎中毒性肝炎等肝病的重要指標。

3 血清丙氨酸氨基轉移酶同工酶的別名

iso-ALT

4 血清丙氨酸氨基轉移同工酶醫學檢查

4.1 分類

血液生化檢查 > 酶類測定

4.2 化驗取材

血液

4.3 驗方

酶類測定

4.4 原理

在ALT速率法測定中酶偶聯反應式為:

上述偶聯反應中,NADH的氧化速率與標本中酶活性呈正比,在340nm波長處,NADH呈現特征性吸收峰,而NAD則沒有。因此,可在340nm監測吸光度的下降速率(-△A/min),計算出ALT的活性單位。

(1)單試劑法:血清與(試劑成分完整的)底物溶液混合,ALT催化反應立即開始,在波長340nm,比色杯光徑1.0cm,37℃經90s延滯期后連續監測吸光度下降速率。根據線性反應期吸光度下降速率(-△A/min),計算出ALT活力單位。

(2)雙試劑法:血清與(缺少α-酮戊二酸的)底物溶液混合,37℃保溫5min,使樣品中所含的α-酮酸(如丙酮酸)引起的副反應進行完畢。然后,加入α-酮戊二酸啟動ALT的催化反應,在波長340nm處連續監測吸光度下降速率。根據線性反應期吸光度下降速率(-△A/min),計算出ALT活力單位。

4.5 試劑

(1)單試劑法:

①試劑成分和在反應液中的參考濃度

pH    7.5

Tris緩沖液    100mmol/L

L-丙氨酸      500mmol/L

α-酮戊二酸   15mmol/L

NADH          0.18mmol/L

磷酸吡哆醛(P-5'-P)*   0.1mmol/L

乳酸脫氫酶(LDH)        1200U/L

②市售ALT底物的復溶及保存:按試劑盒說明書規定。但起始吸光度必須大于1.2A,試劑空白定值必須小于5U/L。達不到要求者,示為此試劑已不合格,不能使用。

(2)雙試劑法:

試劑成分:在反應液中的參考濃度

試劑(Ⅰ):

Tris緩沖液    100mmol/L

L-丙氨酸      500mmol/L

NADH          0.18mmol/L

LDH           1200U/L

pH            7.3

試劑(Ⅱ):

α-酮戊二酸:15mmol/L

4.6 操作方法

(1)單試劑法:

具體操作程序根據各醫院擁有的自動或半自動生化分析儀型號及操作說明書而定。下面以半自動生化分析儀為例。

①血清稀釋度:以100μl血清,加1000μl ALT底物溶液為例,血清稀釋倍數為11,血清占反應液體積分數為0.0909。

②主要參數:

系數          1768

孵育時間      90s

連續監測時間  60s

比色杯光徑    1.00cm

波長          340nm

吸樣量        500μl

溫度          37℃

(2)雙試劑法:以半自動生化分析儀為例。

血清100μl,加試劑(Ⅰ)1000μl,混勻,37℃溫育5min。然后,加入試劑(Ⅱ)100μl,混勻。啟動ALT催化反應。在波長340nm,比色杯光徑1.0cm,延滯期30s,連續監測吸光度下降速率約60s。根據線性反應期吸光度下降速率(-△A/min),計算出ALT活力單位。

附注:

(1)ALT測定中存在著兩個副反應:

①血清中存在的α-酮酸(如丙酮酸)能消耗NADH:

②血清中谷氨酸脫氫酶GLDH)增高時,在有氨存在的條件下,亦能消耗NADH:

(上述副反應都能消耗NADH,使340nm處吸光度下降值(-△A/min)增加,使測定結果偏高。因此,在單試劑法中必須要有足量的LDH(如2000U/L,Scandinavia法;1200U/L,IFCC),才能保證α-酮酸(尤當遇到丙酮酸含量升高的標本)引起的副反應在規定的延滯期內進行完畢。這樣,LDH含量高,試劑成本提高。目前,推薦雙試劑法,因孵育期長,能有效地消除干擾反應,提高測定

準確性,是ALT測定的首選方法。雙試劑法可適當地降低試劑中LDH的用量。至于NH4的干擾,除嚴重肝病時血清谷氨酸脫氫酶活性增高和血氨增高時外,一般說血清中NH4的含量甚微,此干擾反應不大。但LDH原試劑往往是用飽和硫酸銨配制的,廠方在使用前必須經過嚴格的脫氨處理。

(2)血清ALT活性>1000/L(37℃)的樣品,或讀數開始時吸光已很低的樣品(因ALT活性很高,NADH在讀數開始前的溫育期內已經耗盡所致),須用0.9%生理鹽水溶液作適當稀釋后重新測定,測定結果乘以稀釋倍數。

(3)IFCC推薦法中使用了ALT的輔酶P-5'-P,即使正常血清試劑中加或不加P-5'-P測得的ALT活性也有明顯差別(表3)。在某些病理情況下(如Vit B嚴重缺乏)不加P-5'-P將導致ALT測定結果嚴重偏低。加入后則可使ALT活性明顯升高。由于種種原因,目前市售ALT測定試劑盒多末加入P-5'-P。為使同一實驗室的ALT測定結果穩定,加或不加P-5'-P的ALT測定試劑不宜混用。

(4)ALT測定試劑中使用Tris緩沖液為宜。據報道:①NADH在Tris緩沖液中穩定性較高;②P-5'-P在Tris緩沖液中,顯示出更有效的激活作用

(5)試劑空白測定值:以蒸餾水代替血清,測定ALT活力單位,規定測定值應小于5U/L。試劑空白的讀數是由于工具酶中的雜酶及NADH自發氧化所引起。在報告結果時應扣去每批試劑的空白測定值。

(6)正常新生兒ALT水平比成年人約高2倍,出生后約3個月降至成年人水平。新生兒,尤其未成熟兒,肝細胞膜透性較大,ALT從肝細胞滲入血漿,使血清ALT水平升高。

(7)酶連續監測法測定中,要求使用的分光光度計,帶寬≤6nm,比色杯光徑1.00cm,具有30℃或37℃恒溫裝置,能自動記錄吸光度的動態變化。

(8)血清不宜反復冰凍保存,以免影響酶活性。血清置4℃冰箱1周,酶活性無顯著變化。不推薦冰凍保存ALT測定標本。

4.7 正常值

酶測定溫度37℃,底物溶液中不含P-5'-P成分。成人ALT為5~40U/L。近年文獻報告的ALT參考值列于表1。

m-ALT<4.2U/L (免疫沉淀后酶法); m-ALT占ALT的7%~13%(電泳法

4.8 臨床意義

4.8.1 病毒性肝炎隱性感染

血清ALT測定是在非選擇性人群中篩選出無癥狀的病毒性肝炎隱性感染患者的常用指標,具有一定的靈敏度特異性。尤其在獻血者的選擇方面,相當于參考值上限1.5倍的血清ALT升高可作為剔除可能感染肝炎(丙肝)的獻血者的依據。

丙型肝炎感染的早期階段,用干擾素治療可以減輕肝組織學損傷控制病情發展。此外,丙肝早期診斷有助于及時向病人發出勸告忌飲酒,因后者可加重HCV感染者病情。因此早期發現HCV感染者具有重要意義。用病原學檢測方法從普通人群中發現HCV感染者固然可靠,但花費太大,而較實用的方法是采用適當的篩選試驗,篩選出高危人群,再進一步用特異性抗HCV抗體試驗,如第二代酶聯免疫吸附試驗(HCV EIA2.0)檢測抗HCV抗體,陽性確認為HCV感染。Lapane等的評價研究表明,血清ALT作為HCV篩選指標陽性預測率為34%,明顯高于以包括社會侵入性危險因子(IV毒品史、與IV毒品者的性接觸史等)和非社會侵入性危險因子(輸血史、30~49歲年齡段以及男性等)在內的HCV感染危險因子為基礎的數學預測方程等方法所預測的陽性率(14%~22%),預測的特異性(92%),也高于后者(74%~84%),只是所需費用比后者高1.1~1.7倍。

4.8.2 性病毒性肝炎

急性病毒性肝炎典型病例在黃疸出現前1~2周血清ALT、AST活性即開始迅速升高,至黃疸出現后達峰值,并保持1~2周,此后即迅速下降,至黃疸出現后6~7周基本恢復正常。急性期血清ALT、AST的升降基本保持平行,ALT的增高幅度一般大于AST。不同類型急性病毒性肝炎的血清ALT演變規律不一。甲型肝炎血清ALT在達到高峰后下降較快,常在2~4周內降至正常。部分乙型肝炎患者發病后血清ALT緩慢上升,緩慢下降,降至100~200U/L左右常遷延一段時間,約需2~3個月更長時間才恢復正常。丙型肝炎病人ALT升高持續時間更長。如ALT活性長期持續升高或反復波動,可能向慢性發展。也有一些輕型無黃疸型肝炎病人只有一過性ALT升高,短期內即恢復正常。

急性肝炎時,血清ALT、AST升高幅度大致能反映肝細胞壞死程度,即ALT升高幅度一般與肝細胞損害程度相平行,如病情較嚴重的黃疸型肝炎血清ALT升高幅度一般比無黃疸型肝炎大。但是,二者之間的關系也不完全如此。暴發型肝炎時,由于肝細胞廣泛而嚴重的壞死,肝細胞漿內ALT已釋放殆盡,加之ALT半衰期較短,導致血中酶活性逐漸降低,而血清膽紅素(TBil)繼續進行性升高,二者不再保持平行關系,出現所謂“酶膽分離”現象。

4.8.3 在慢活肝診斷中的意義

慢性活動性肝炎(慢活肝)患者血清ALT也都持續或無規律反復增高,增高幅度(多數比正常高3~5倍)一般大于慢性遷延性肝炎(慢遷肝,CPH)(多數比正常高1~2倍)。

血清ALT是反映慢性乙型肝炎活動性的良好指標。賴炎卿等應用肝組織炎癥活動性指數(Histological activity index,HAD,對102例慢性乙型肝炎切片進行復核,評分并與血清ALT進行相關分析,結果表明,高HAI(10.5~15分)的慢性肝炎患者血清ALT異常升高(>40U/L)的比例19/28(67.9%)明顯高于低HAI(0~10分)者(13/62,21.0%),慢性肝炎患者肝組織形態學定量研究也證明,血清ALT與肝小葉內炎癥壞死程度及肝總壞死面積呈顯著正相關,與肝實質面積成顯著負相關。這些結果提示ALT異常升高可作為慢性活動性(乙型)肝炎(慢活肝,CAH)的診斷指標之一。

丙型肝炎患者血清ALT與肝HAI之間的關系可能有別于乙肝。Haber等的臨床評價結果表明,一定范圍內的ALT、AST值與慢性丙型肝炎HAI之間并無相關性,只是ALT、AST升高10倍(≥350U/L)時,與肝片狀壞死相關。盡管肝活動性最小的慢遷肝血清ALT、AST(±s分別為110±71、57±34U/L),明顯低于輕度或中度活動性的慢活肝(ALT、AST ±s分別為256±211、123±88U/L),盡管慢活肝無片狀壞死時血清ALT、AST(分別為133±84、73±47U/L)顯著低于有片狀壞死者(ALT、AST、分別為207±149、120±83U/L),但是,肝活動性不同的各組之間ALT、AST測定值存在相當程度的重疊。Haber據此認為,轉氨酶并不能預測慢性丙肝肝組織學狀況,盡管ALT≥10倍升高提示有肝片狀壞死存在。

另一方面,丙肝患者血清ALT正常也不能排除肝可能存在活動性病變。Gholson等報道的303例丙肝患者,有50例(占16.5%)在做肝穿刺前至少6個月血清ALT、AST一直維持正常,但肝活檢證實,其中15人為活動性肝炎。

4.8.4 判斷肝炎病毒復制和有無傳染性中的意義

HBV核心抗原HBcAg)是存在于HBV顆粒核心部分的抗原。乙型肝炎e抗原HBeAg)存在于乙型肝炎表面抗原HBsAg)陽性的患者與HBsAg攜帶者的血清中,與DNA聚合酶密切相關,是HBV在體內復制的重要指標,也是提示血液有傳染性的重要指標。臨床觀察到,血清ALT異常(≥46U/L)時,HBcAg陽性率(45%,n=92)顯著高于ALT正常時HBcAg陽性率(33.3%,n=58)(P<0.01)。而且ALT異常時HBeAg陽性率43.1%(n=88)遠高于ALT正常時陽性率26.8%(n=76)(P<0.01),說明血清ALT升高與HBV在體內復制有一定關系。

ALT水平與血清HCV-RNA檢出率之間也有一定關系。高志良等報道,在ALT>200U/L(正常值<25U/L)的91例中,HCV RNA陽性39例(42.9%)。ALT<200U/L的23例異常者中,有8例陽性(34.8%);ALT水平正常的12例中僅1例(8%)HCV RNA陽性。結果顯示,HCVRNA的檢出率在ALT異常情況下較正常時明顯高(P<0.005),表明ALT水平高低與病毒在體內的復制活躍有一定關系。

4.8.5 在干擾素治療丙肝療效評價中的意義

干擾素是目前治療慢性丙型肝炎(CH-C)唯一有效的藥物。其療效評定多以血清HCV RNA和ALT水平為標準。完全反應者表現為血清HCV RNA消除,ALT正常;不完全反應者,則ALT正常,HCVRNA則保持陽性。Shiffman等報道,慢性HCV病人用干擾素α-2b治療6個月后半數病人(45/90)血清ALT由治療前的132.3±19.3U/L降至34.5±3.2U/L,下降非常顯著(P<0.01),與Knodell組織學HAI積分由治療前的9.6±0.5降至治療后的5.0±0.5(P<0.01)以及log HCV-RNA含量(copies/ml)由治療前的5.07±0.19降至4.76±0.28(P<0.01)一致。瞿為溶等報道的干擾素α-2a的療效與此接近。16例CH-C經干擾素α-2a治療半年后,其中10例血清ALT呈完全反應,其HAI積分由治療前的6.9±2.6降至治療半年后的4.6±1.8(P<0.05)。由此可見,血清ALT可作為干擾素對CH-C療效的評價指標。

4.8.6 m-ALT的臨床意義

理論上,血清m-ALT值的高低可反映肝細胞亞細胞水平的損害程度。急性黃疸型肝炎(90±91U/L,n=40)和慢性活動性肝炎(63±51U/L,n=30),血清m-ALT顯著高于對照組(1.42±1.05U/L,n=31)(P<0.001),而慢性遷延性肝炎(9±3U/L,n=6)和肝硬化組(4±3U/L,n=8)與正常對照組比,無明顯差別。提示血清m-ALT的檢測對于判斷急性肝炎肝實質損害程度以及慢活肝和慢遷肝的鑒別診斷具有一定的診斷價值。

4.8.7 在其他疾病時的變化

萊姆病早期可出現肝功能損害。Horowitz等報道,115例有作為早期萊姆病特征的游走性紅斑(erythema migrane,EM)的萊姆病病人中有31例(27%)血清ALT輕度升高,與正常對照組ALT升高率(7/100,7%)相比,差別顯著(P<0.001),血清GGT

4.9 相關疾病

GT     敗血癥     丙型肝炎     傳染性單核細胞增多癥     肝損傷     肝硬化     黃疸     甲型肝炎     萊姆病     傷寒     藥物性肝病     乙肝     脂肪肝

4.10 參考資料

《新編臨床檢驗與檢查手冊》、《新編化驗員工作手冊》

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開放分類:化驗及醫學檢查
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  • 評論總管
    2019/7/19 14:25:47 | #0
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