血管緊張素轉換酶

1 概述

血管緊張素轉化酶（ACE）又稱激肽酶Ⅱ或肽基-羧基肽酶，系統命名為肽基-二肽水解酶。屬血管內皮細胞膜結合酶，由肽的C端將氨基酸切為兩段變換而來，可使肽鏈C端二肽殘基水解。ACE可催化血管緊張素Ⅰ（十肽）水解成八肽的血管緊張素Ⅱ，使血管進一步收縮，血壓升高。也可作用于腎上腺皮質，促進醛固酮的分泌。因此，ACE是腎素-血管緊張素-醛固酮的重要成分。ACE還催化具有降壓作用的緩激肽水解而失去活性。ACE廣泛分布于人體各組織，以附睪、睪丸及肺的含量較豐富，其中肺毛細血管內皮細胞ACE活性最高。腎、腦垂體等組織酶活性較低。ACE測定方法主要有比色法、酶偶聯法等。

2 血管緊張素轉換酶的別名

血管緊張素轉化酶

3 血管緊張素轉換酶的醫學檢查

3.1 檢查名稱

血管緊張素轉換酶

3.2 分類

血液生化檢查 > 酶類測定

3.3 取材

血液

3.4 血管緊張素轉換酶的測定原理

（1）三硝基苯磺酸鈉（INBS）顯色法：底物馬尿酰-甘氨酰-甘氨酸（Hip-Gly-Gly）在ACE作用下，釋放出甘氨酰-甘氨酸（Gly-Gly），后者與三硝基苯磺酸（TNBS）作用，生成黃色的三硝基苯-甘氨酰-甘氨酸（TNP-Gly-Gly），其含量與ACE活性呈正相關。

（2）酶偶聯法：ACE使底物馬尿酸雙甘肽（Hip-Gly-Gly）水解成馬尿酸（Hip）和雙甘肽（Gly-Gly），后者與L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺（GGCN）和γ-谷氨酰基轉移酶（GGT）偶聯，形成3-羧基-4-硝基苯胺，在340nm處測其吸光度，以反映ACE活性。

3.5 試劑

（1）三硝基苯磺酸鈉（INBS）顯色法：

①底物液：用5mmol/L的Tris溶液配制30mmol/L HGG溶液，此液中含0.4mol/L Na₂SO₄、0.3mol/L NaCl，調pH7.3。

②0.1mol/L硼酸鹽緩沖液（pH9.0）。

③100g/L鎢酸鈉（含2個水）溶液。

④0.33mol/L NaSO₄。

⑤60mmol/L TNBS溶液。

⑥40mmol/L Gly-Gly。

（2）酶偶聯法：

①50mmol/L HEPES緩沖液：稱羥、乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）1.191g，加雙蒸餾水100ml溶解，用于配制GGT、CGCN和基質緩沖液。

②20kU/L GGT貯存液：取HEPES緩沖液5ml，加入GGT 100U，混勻后分裝小瓶，－20℃保存。

③6.7kU/L GGT應用液：將上述貯存液用二倍量的HEPES稀釋配制。

④0.1mmol/L GGCN溶液：稱GGCN 20mg，加入50mmol/L HEPES 60ml，溶解后4℃保存。

⑤基質緩沖液：稱HEPES 1.191g，NaCl 1.755g，Na₂SO₄ 5.68g，用雙蒸餾水溶解后，用NaOH調pH至8.0，再補充雙蒸餾水至100ml，4℃保存。

⑥基質液：由Hip-Gly-Gly 89.5mg加基質緩沖液10ml溶解混合而成。此液各試劑終濃度為：HEPES 50mmol/L，NaCl 30mmol/L，Na₂SO₄ 400mmol/L，Hip-Gly-Gly 30mmol/L。

⑦10mmol/L雙甘肽標準液：稱Gly-Gly 52.9mg加雙蒸餾水溶解，并稀釋至100ml，此為貯存液（40mmol/L）。1份貯存液和3份雙蒸餾水混合即為應用液。

3.6 操作方法

（1）三硝基苯磺酸鈉（INBS）顯色法：取試管2支，標明空白管（B）和測定管（U），各加血清0.01ml，B管加試劑（1）、（3）、（4），U管加底物0.1ml，置37℃水浴30min；U管加試劑（3）、（4）各0.1ml，然后B、U管各加蒸餾水1.0ml，混勻；1500g離心10min，各取上清液0.75ml，分別加入試劑（2）1.0ml及TNBS 0.05ml，室溫30min或37℃ 15min，用5mm比色杯，在420nm處，B管調零，讀取U管吸光度。

（2）酶偶聯法：取小試管4支，分別標明測定管（U），標準管（S），血清空白管（SB），試劑空白管（RB）。按表1操作。

混勻，以雙蒸餾水調零點，410nm波長比色，記錄各管2min吸光度△A值。

3.7 正常值

（1）三硝基苯磺酸鈉（INBS）顯色法：26.1～56.7kU/L。

（2）酶偶聯法：289±83U/L。

3.8 化驗結果臨床意義

血清ACE測定主要同于肺部疾病的診斷，對其他系統疾病的診療也有一定

價值。

（1）肺部疾病：絕大多數結節病患者血清ACE活力升高，其陽性率及幅度與病情活動與否和病變累及的范圍有關。肺結核也可升高，而哮喘發作、急性心原性肺水腫、慢性阻塞性肺疾患、自發性氣胸、肺纖維化、成人呼吸窘迫綜合征等血清ACE均有不同程度下降。

（2）肝臟疾病：多數肝臟病患者ACE活性升高，升高幅度依次為肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎。脂肪肝則正常。

（3）甲狀腺疾病：甲亢患者ACE活性明顯高于其他甲狀腺疾病，且酶活力高低與T₃、T₄含量呈正相關。

（4）其他：糖尿病、虹膜炎、免疫母細胞肉瘤等，血清ACE升高；高血壓、結腸炎等則降低。

3.9 附注

（1）三硝基苯磺酸鈉（INBS）顯色法：

①標本在室溫或冰箱存放1周，酶活力無明顯變化，－15℃保存3周酶活性穩定。

②膽紅素對ACE有明顯抑制作用，故重度黃疸可使測定結果偏低。EDTA是ACE的強抑制劑，NaCl和Na₂SO₄對ACE有明顯的活化作用，溶血、脂血對結果無影響。

③本法與紫外分光光度法酶活力單位一致，但其測得值為紫外法的9倍。

（2）酶偶聯法：

①當底物pH 8.0，GGCN 1.0mmol/L，GGT6.7ku/L時，ACE活性與吸光度值有良好線性。線性范圍大，即使ACE在1500U/L，不用稀釋也可獲得理想結果。

②GGCN濃度選擇：本反應體系中GGCN既是測定酶ACE的受體，又是指示酶GGT的供體。以1.0mmol/L的GGCN最理想，在此濃度下GGCN與吸光度保持良好的線性。

③GGT對測定的影響：本反應利用GGT將雙甘肽與GGCN偶聯，生成黃色的3-羧基-4-硝基苯胺，其加入量可直接影響測定結果。GGT高濃度可使底物過度消耗，使吸光度偏離曲線；低濃度GGT又使吸光度偏低，靈敏度不高。每次加入0.335 U GGT，可獲得理想吸光度與線性。在此濃度下，酶基質液的空白管吸光度＜0.1A。

3.10 相關疾病

結節病、肺結核、肺水腫、自發性氣胸、氣胸、肝硬化、脂肪肝、糖尿病、肉瘤、黃疸

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