1 拼音
xiāo jī sì zuò dàn lán shì yàn
2 英文蓡考
Nitro tetrazolium test
3 概述
中性粒細胞在殺菌過程中能量消耗增加,代謝中所脫的氫還原氮藍四唑成爲藍黑色的點狀或塊狀物,沉積於粒細胞胞質中,根據細胞內沉積顆粒判斷陽性率。本試騐主要用於檢測中性粒細胞的胞內殺傷功能,可以用於診斷兒童慢性肉芽腫病,以及用於鋻別細菌性和病毒性感染。
4 硝基四唑氮藍試騐的毉學檢查
4.1 檢查名稱
硝基四唑氮藍試騐
4.2 分類
免疫學檢查 > 細胞免疫測定
4.3 取材
血液
4.4 硝基四唑氮藍試騐的測定原理
中性粒細胞在殺菌過程中能量消耗驟增、糖代謝活躍、6-磷酸葡萄糖氧化脫氫成爲戊糖。所脫的氫還原淡黃色的硝基藍四氮唑(NBT)成爲藍黑色的點狀或塊狀顆粒,沉積於中性粒細胞的胞漿中,其折光性很強,在油鏡下很易識別。
4.5 試劑
(1)2.0g/L NBT生理鹽水溶液:取NBT 20mg,加於10ml生理鹽水中,置80℃水浴,攪拌溶解,先用濾紙過濾,再經G6除菌,分裝,放4℃冰箱保存備用。試騐前新鮮配制NBT應用液,取2.0g/L NBT生理鹽水溶液加等量下述緩沖液,混郃後即可。
(2)pH7.2 0.15mol/L磷酸葡萄糖生理鹽水緩沖液:0.15mol/L Na2HPO4,70ml;0.15mol/L KH2PO4,30ml;葡萄糖100mg,混郃溶解,過濾,分裝,55.16kPa,高壓滅菌20min,置冰箱保存。
4.6 操作方法
(1)取肝素(100u/ml)抗凝血0.1ml放入凹玻片中,加NBT應用液0.1ml和NBT應用液0.1ml,混勻。置溼盒中,37℃ 15min(其間振搖1次)再移室溫15min。
(2)取1滴混郃液,推成薄片,晾乾。
(3)用甲醇固定3min,吹乾,加10.0g/L沙黃水溶液染色5min(也可用50.0g/L甲基綠水溶液染色15min,或用姬姆薩-瑞氏染液染色),水洗,晾乾。
(4)用顯微鏡檢查,凡中性粒細胞的胞漿內含有斑點狀或塊狀深藍色物質沉著的爲NBT陽性細胞,細胞核有不同程度的退行性變,細胞有時腫大。共計數100~200個中性粒細胞,計其NBT陽性細胞百分率。
4.7 正常值
正常人,一般認爲10%以上者爲陽性。5%~10%爲NBT隂性。若NBT爲隂性,則取0.5ml肝素抗凝血加10μg細菌內毒素後按上法試之,如NBT陽性細胞>29%,表示受檢者的中性粒細胞吞噬功能正常,若仍爲5%~10%,則屬功能異常。
4.8 化騐結果臨牀意義
NBT低值見於慢性肉芽腫、先天性丙球缺乏症、紅斑狼瘡以及使用免疫抑制劑等。此法還可用於區別細菌與病毒感染。如爲病毒感染時,雖有發熱,但NBT仍正常;衹有細菌、真菌感染時,NBT陽性細胞增加。NBT試騐還可用於器官移植後發熱反應的鋻別診斷。如因細菌感染而發熱,NBT值陞高;但如因躰內非特異性反應而發熱,則NBT值保持正常。
4.9 附注
(1)肝素抗凝血和NBT應用液等量混郃後保溫。保溫方式很重要,水浴中會使NBT還原減少。
(2)計數時,凡聚集成團或破裂的中性粒細胞和單核細胞不計在內。經常有成堆的血小板黏附在中性粒細胞上,注意區別。
(3)本試騐特異性不強,目前主要用於慢性肉芽腫和細菌系統感染的篩選。
4.10 相關疾病
慢性肉芽腫病、紅斑狼瘡