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脫氧核糖核酸染色

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1 拼音

tuō yǎng hé táng hé suān rǎn sè

2 英文參考

Deoxyribonucleic Acid Stain

3 概述

脫氧核糖核酸是組成細胞核的成分,與特殊染液作用,被染成淺紅色或紫紅色。

4 檢查名稱

脫氧核糖核酸染色

5 化驗類別

血細胞化學染色、血液檢查 > 血液檢查

6 取材

血液

7 脫氧核糖核酸染色的原理

末端脫氧核糖核酸轉移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT)是一種細胞內酶,催化細胞的脫氧核苷酸,使其轉移到低聚核苷酸或多聚核苷酸的3'-OH端而無需模板指導。兔抗牛TdT抗體能和人細胞的TdT產生交叉反應,可采用免疫熒光技術或酶標免疫細胞化學技術用辣根過氧化酶-抗酶復合物(PAP immunocomplex)在細胞涂片或組織切片上定位顯示細胞內的TdT。

采用PAP免疫細胞化學技術得到的結果與免疫熒光法相一致,該法更加靈敏,陽性率增高,可精確的定位TdT。

8 試劑

(1)正常兔血IgG

(2)免抗牛TdT抗體1∶8稀釋。

(3)羊抗兔IgG 1∶10稀釋。

(4)PAP免疫復合物(PAP immunocomplex from rabbit)1∶20稀釋。

(5)二氨基聯苯胺(3,3'-diaminobenzidine,DAB)溶液0.05mol/L Tris-HCl-9g/L NaCl液(pH7.4)100ml,含過氧化氫(V/V)為0.03%,4℃保存,用前加入30mg DAB,溶解過濾,立即避光使用。

(6)過氧化氫-甲醇固定液:甲醇液中含過氧化氫濃度為0.03%(V/V),4℃保存。

(7)0.1mol/L磷酸緩沖液(pH7.2)。

9 操作方法

(1)新鮮抗凝血標本,用比重1.077的淋巴細胞分離液作密度梯度分離,取淋巴細胞層細胞離心涂片,空氣干燥。或不作細胞分離,直接涂片。

(2)涂片用過氧化氫-甲醇液于4℃下固定20~30min,以阻斷細胞的內源性過氧化酶。

(3)涂片在0.1mol/L磷酸鹽緩沖液中浸泡15min,滴加正常兔血清,以減少抗體非特異性結合。

(4)滴加兔抗牛TdT抗體,37℃保溫30min。

(5)滴加羊抗兔IgG抗體,37℃保溫30min。

(6)滴加PAP免疫復合物,37℃保溫30min。

(7)將涂片浸入DAB溶液,室溫作用5~10min。

(8)水洗5min,干后鏡檢,或用哈氏蘇木素染液復染胞核10min。

10 正常值

幼稚血細胞脫氧核糖核酸顆粒堆積、聚集、染色深、成熟血細胞脫氧核糖核酸顆粒分布均勻,細小,染色淺。

11 臨床意義

1.鑒別細胞的成熟程度,如小原粒細胞與成熟淋巴細胞的區別,小原粒細胞染色淺、核仁明顯;淋巴細胞染色深。

2.鑒別急性白血病的類型,原淋巴細胞反應較強,染色質染成粗顆粒;原粒細胞核反應減弱,染色質呈較淡的細顆粒狀;原單核細胞反應最弱,染色質呈纖細網狀,染色較淺。

(1)急性淋巴細胞白血病DNA顆粒粗、色深、核仁小而少)。

(2)急性粒細胞白血病 (DNA顆粒細、色淡、核仁多而大)。

(3)急性單核細胞白血病(DNA顆粒細、色淡、分布疏散)。

3.鑒別巨幼紅細胞與正常紅細胞,巨幼紅細胞核染色淡呈細網狀,正常紅細胞核染色深呈粗顆粒至塊狀。

12 附注

操作中4~6每次均需用0.1mol/L磷酸鹽緩沖液沖洗2次,以免沉渣出現。浸入DAB溶液作用應避光操作。DAB為致癌劑應注意皮膚防護。

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開放分類:血液檢查化驗及醫學檢查血細胞化學染色、血液檢查
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  • 評論總管
    2019/7/18 10:30:01 | #0
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