熱詞榜

t-PA

廣告
廣告
醫學百科提醒您不要相信網上藥品郵購信息!
這是一個重定向條目,共享了組織纖維溶酶原激活物的內容。為方便閱讀,下文中的組織纖維溶酶原激活物已經自動替換為t-PA,可點此恢復原貌,或使用備注方式展現

1 檢查名稱

t-PA

2 分類

臨床血液檢查/出血和凝血檢查

3 t-PA的別名

組織纖維溶酶原激活物

4 概述

組織纖溶酶原激活物是一種單鏈糖蛋白,主要由血管內皮細胞合成、分泌,不斷釋放入血液,廣泛存在于機體的各種組織內,肝臟是組織纖溶酶原激活物滅活的主要場所。它對纖維蛋白有高度親和力,然后酪氨酸纖溶酶原形成纖溶酶。降解纖維蛋白(原)和部分凝血因子。是纖溶系統的關鍵物質。

5 原理

(1)活性測定(組織纖維溶酶原激活物∶A,發色底物法之一):血漿球蛋白部分含有包括組織纖維溶酶原激活物以及全部凝血因子,但不含PA抑制物。加入過量的纖溶酶原與纖維蛋白的共價物,樣品中之組織纖維溶酶原激活物易吸附于纖維蛋白,并將血纖溶酶原轉變成纖溶酶,后者使發色底物顯色。血漿t-P組織纖維溶酶原激活物與顯色的深淺呈正相關

(2)活性測定(組織纖維溶酶原激活物∶A發色底物法之二):在組織纖維溶酶原激活物和加速劑作用下,纖溶酶原轉變為纖溶酶,后者使發色底物S-2390釋放出發色基團PNA。PNA顯色的深淺與纖溶酶和組織纖維溶酶原激活物呈正比關系。

(3)抗原測定(組織纖維溶酶原激活物∶Ag)ELISA法:本試驗根據雙抗體夾心法原理,即將純化的組織纖維溶酶原激活物單克隆抗體包被在固相載體上溫育,然后加含有抗原的待測標本。標本中的組織纖維溶酶原激活物抗原與固相載體上的抗體形成復合物。此復合物與過氧化物酶標記的組織纖維溶酶原激活物單克隆抗體起抗原抗體結合反應,形成組織纖維溶酶原激活物-POD復合物。后者可使鄰苯二胺基質液呈棕色反應,其反應顏色深淺與標本中組織纖維溶酶原激活物含量呈正比關系。

6 試劑

6.1 (1)活性測定(組織纖維溶酶原激活物∶A,發色底物法之一):

①50mmol/L磷酸緩沖液

②纖維蛋白-纖溶酶原共價物:375mg/L的纖維蛋白,250μ/L的纖溶酶原。

③發色底物:3mol/L S-2251(H-D-Val-Leu-Lys-PNA)。

④組織纖溶酶原激活原激活劑。

⑤0.25%醋酸

⑥組織纖維溶酶原激活物標準1和2(S1 5.6IU/ml,S2 2.8IU/ml)。

6.2 (2)活性測定(組織纖維溶酶原激活物∶A發色底物法之二):

上海醫科大學試劑盒。

標準品組織纖維溶酶原激活物(80IU)。

②去組織纖維溶酶原激活物人血漿。

③人纖溶酶原。

④發色底物S-2390。

⑤濃緩沖液TB。

⑥加速劑。

⑦濃抗凝液。

⑧濃酸化液。

⑨其他:蒸餾水、50%冰醋酸

6.3 (3)抗原測定(組織纖維溶酶原激活物∶Ag)ELISA法:

①抗體:抗組織纖維溶酶原激活物F(2b')2

②過氧化物酶抗體復合物抗:組織纖維溶酶原激活物-peroxidase。

③基質:鄰苯二胺。

④基質緩沖液:0.2mol/L檸檬酸,0.2mol/L檸檬酸鈉緩沖液。

⑤稀釋緩沖液:白蛋白-磷酸鹽緩沖液(PBS-BSA)。

洗滌液:0.025mol/L氯化鈣-Tween-20-PBS緩沖液。

⑦組織纖維溶酶原激活物標準:組織纖溶酶原繳活物。

⑧0.11mol/L檸檬酸鈉溶液

⑨30% H2O2

⑩終止液:3mol/L硫酸或1mol/L鹽酸

7 操作方法

(1)活性測定(組織纖維溶酶原激活物∶A,發色底物法之一):

①血漿處理:按表1進行操作。

②操作方法:按表2進行。

(2)活性測定(組織纖維溶酶原激活物∶A發色底物法之二):

①血漿制備:靜脈采血,置于含1/10體積抗凝液的硅化試管中,盡快低溫分離血漿。取血漿200μl,加酸化液200μl,混勻,置-30℃保存。測定時酸化血漿作1∶60稀釋。

②取去組織纖維溶酶原激活物血血漿和組織纖維溶酶原激活物標準品配制標準組織纖維溶酶原激活物系列(表3)。

③加樣:取潔凈96孔平底酶標板一塊,將上述準備好的待測血漿樣品和組織纖維溶酶原激活物標準品加到各孔中,100μl/孔。

④發色底物混合液:將纖溶酶原、發色底物和加速劑混合,立即100μl/孔加至酶標板各孔中。

⑤反應:置濕盒中,37℃溫育5h,加50%冰醋酸20μl終止反應。

⑥測定:測定各孔A405。以標準系列中不含組織纖維溶酶原激活物孔調零點,然后讀數。

(3)抗原測定(組織纖維溶酶原激活物∶Ag)ELISA法:

①用0.05mol/L碳酸鹽緩沖液稀釋組織纖維溶酶原激活物抗體。

②用稀釋緩沖液稀釋抗體-POD結合物。

③用基質緩沖液溶解鄰苯二胺(8mg/ml),并加入10μl 30% H2O2

④將組織纖維溶酶原激活物標準倍比稀釋成10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125IU/ml。

⑤標本稀釋:1份檸檬酸鈉抗凝血漿加5份稀釋液。如果估計組織纖維溶酶原激活物值增高,血漿作1∶10稀釋。

⑥用稀釋之組織纖維溶酶原激活物抗體包被ELISA反應板,每孔200μl,溫育過夜,然后用洗滌液洗3次。

⑦加標準/標本200μl,溫育1h后,同上洗滌3次。

⑧加過氧化物酶抗體復合物200μl,溫育1h后,同上洗滌3次,洗后立即加基質。

⑨每孔加基質200μl,顯色10~15min。

⑩加硫酸(3mol/L)50μl或鹽酸(1mol/L)100μl,10min中止反應,于492nm,2h內比色,以稀釋緩沖液為本底。

⑪據吸光度讀數由標準曲線查得組織纖維溶酶原激活物含量。

8 正常值

(1)活性測定(組織纖維溶酶原激活物∶A,發色底物法之一):0.3IU/ml。

(2)活性測定(組織纖維溶酶原激活物∶A發色底物法之二):  1.9±0.7IU/ml。

(3)抗原測定(組織纖維溶酶原激活物∶Ag)ELISA法:        1~12ng/ml。

9 臨床意義

(1)活性測定(組織纖維溶酶原激活物∶A,發色底物法之一):

①肝壞死常伴有纖溶活性的異常,由于消除功能障礙,故組織纖維溶酶原激活物∶A往往增高。但同時由于PAI的活性增強故組織纖維溶酶原激活物的活性實際上是降低的。在DIC和伴有血栓形成傾向的疾病往往有組織纖維溶酶原激活物活性減低。冠心病心肌梗死患者PA活性減低。

先天性組織纖維溶酶原激活物活性增強已有報道。急性早幼粒細胞白血病患者組織纖維溶酶原激活物往往增高。

遺傳性PA活性缺乏為常染色體顯性遺傳。患者表現為多發性靜脈血栓形形形成。

(2)活性測定(組織纖維溶酶原激活物∶A發色底物法之二):

①組織纖維溶酶原激活物∶A增高:表明纖溶活性亢進,見于原發性繼發性纖溶癥,如DIC等。

②組織纖維溶酶原激活物∶A減低:表明纖溶活性減弱,見于高凝狀態和血栓性疾病

(3)抗原測定(組織纖維溶酶原激活物∶Ag)ELISA法:

①組織纖維溶酶原激活物含量隨年齡、劇烈運動和應激反應而增高,靜脈滯留導致組織纖維溶酶原激活物含量增加。

②先天性組織纖維溶酶原激活物含量增高癥。

③高血脂、肥胖癥、口服避孕藥、冠心病、心肌梗死、動脈血栓形成、缺血性中風等組織纖維溶酶原激活物含量減低。

10 附注

(1)活性測定(組織纖維溶酶原激活物∶A,發色底物法之一):

①血漿中肝素濃度超過1.5IU/ml,對本試驗有影響。

②采血時最好不用止血帶,加壓后會引起組織纖維溶酶原激活物進入血液。

樣本必須酸化處理。否則受PAI的影響較大。

(2)抗原測定(組織纖維溶酶原激活物∶Ag)ELISA法:ELISA法是一項特異性敏感性較高的免疫學試驗。因此必須嚴格控制每項試驗的條件。

相關文獻

開放分類:化驗及醫學檢查臨床血液檢查出血和凝血檢查
詞條t-PA
參與評價: ()

相關條目:

參與討論
    抱歉,功能升級中,暫停討論
    特別提示:本文內容為開放式編輯模式,僅供初步參考,難免存在疏漏、錯誤等情況,請您核實后再引用。對于用藥、診療等醫學專業內容,建議您直接咨詢醫生,以免錯誤用藥或延誤病情,本站內容不構成對您的任何建議、指導。

    本頁最后修訂于 2013年2月20日 星期三 15:43:42 (GMT+08:00)
    關于醫學百科 | 隱私政策 | 免責聲明
    京ICP備13001845號

    京公網安備 11011302001366號


    鏈接及網站事務請與Email:聯系 編輯QQ群:8511895 (不接受疾病咨詢)