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腦脊液環磷酸腺苷

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1 概述

環磷酸腺苷是體內一種具有廣泛生物效應的物質,在腦組織腦脊液中含量更高。因此當腦和腦膜疾患時,由于細胞代謝紊亂可導致腦脊液中cAMP含量的改變,檢測cAMP可能較蛋白質葡萄糖和細胞計數等指標更敏感

2 腦脊液環磷酸腺苷的別名

腦脊液環磷腺苷

3 腦脊液環磷酸腺苷醫學檢查

3.1 檢查名稱

腦脊液環磷酸腺苷

3.2 分類

體液排泄物檢查 > 腦脊液檢查

3.3 化驗取材

腦脊液

3.4 腦脊液環磷酸腺苷的測定原理

cAMP是一種小分半抗原,其特異性抗體是以人工合成的2'-O-ScAMP-BSA結合物免疫動物所獲得。抗體對2'-O-位有取代基的cAMP的親和力較無取代基的cAMP約大100倍。為提高測定方法靈敏度,測定時應將[3H]標記cAMP,樣品和標準同時進行琥珀酰化反應然后和抗體反應。從標準曲線查出樣品中的濃度。

3.5 試劑

(1)抗血清

①ScAMP的合成:取cAMP20mg,琥珀酸酐100mg至反應瓶中,加去離子水2ml,三乙胺0.2ml,磁力攪拌反應30min。置真空干燥內減壓除去三乙胺。加水20ml,放24h,用1mol/L NH4OH調至pH7.0。即刻用強堿型聚苯乙烯離子交換柱層析。0.3mol/L甲酸淋洗,收集258nm流出液。合并,冷凍干燥,產物為ScAMP。

②取SCAMP:經偶聯劑作用和BSA結合,作為免疫原,注射山羊或家兔,制備抗血清。

(2)[3H]-SCAMP:取[3H]-cAMP(中國原子能研究院產品)92.5kBq(2.5μCi)至瓶中,加琥珀酸酐5mg,去離子水0.1ml,三乙胺10μl,即刻混合,用力搖45s,加50mmol/L pH6.2醋酸緩沖液至10ml,臨用前配制。

(3)50mmol/L pH6.2醋酸鹽緩沖液:取AR級無水醋酸鈉4.1g于800ml蒸餾水中,加茶鹼1.44g,溶解后用2mol/L醋酸調至pH6.2,加蒸餾水至1000ml,4℃保存

(4)標準cAMP液(320nmol/L):取純化cAMP1.11mg,加50mmol/L pH6.2醋酸鹽緩沖液10ml,微溫至溶,放-20℃可長期保存。

(5)標準cAMP(320pmol/瓶) 取標準cAMP液0.2ml至10ml容量瓶中,加去離子水至10ml刻度。取5ml帶塞瓶,每瓶加50μl,放37℃干燥,4℃水箱可保存3年內穩定

(6)酰化試劑:取200mg/ml琥珀酸酐丙酮液2.5ml,三乙胺0.9ml混合,臨用前新配。

(7)閃爍液:取PPO4g,POPOP 100mg,加AR級二甲苯1000ml。

3.6 操作方法

(1)腦脊液采集:取腦脊液3ml,即刻加至預先放有0.25mol/L EDTA Na2 50μl的冷試管中,迅速混勻,離心(3500r/min)10min,放-20℃保存。

取腦脊液1ml至提取管中,加無水乙醇3ml,置快速混勻器上1min,離心,上清液傾至15ml蒸發皿中,向沉淀物中加75%乙醇3ml重復提取一次。上清液合并,置55℃水浴上吹干。殘渣溶于0.5ml 50mmol/L pH6.2醋酸鹽緩沖液。

(2)組織樣品處理:活組織取得后即刻置氮氣中,快速稱取30~50mg于研磨器中,加50mmol/LpH6.2醋酸鹽緩沖液1ml,制成勻漿后即刻放沸水浴中3~5min。離心,取上清液放-20℃保存。

(3)標準工作液:取標準cAMP一瓶,加50mmol/L pH6.2醋酸鹽緩沖液1ml。另取試管7只,各加50mmol/L pH6.2醋酸緩沖液0.5ml,從標準液中吸出0.5ml至第一管,依次作倍比稀釋。此系列標準液50μl中含有0.125~8pmol。臨用前稀釋。

(4)10mm×100mm玻璃試管,NSB管加緩沖液150μl,S0管加緩沖液50μl,S1~7管加不同濃度標準液50μl,測定管加待測樣品50μl。

(5)向每管加酰化試劑10μl,即刻用力搖5~10s。各管加[3H]-SCAMP液50μl。

(6)除NSB管外,各加抗血清100μl。混勻,放4℃反應2.5h。向每管加冷緩沖液1ml。

(7)將反應液滴加至聯接抽氣泵的微孔濾膜上抽濾,再加2ml冷緩沖液洗滌反應管,亦加至膜上抽濾。取下濾膜,放80℃30min。

(8)將濾膜放至預先加有5ml閃爍液的計數瓶中,放2h后在自動液體閃爍測量儀上測放射性。

(9)以B0/B為縱坐標,標準管濃度為橫坐標,在普通方格紙上作圖,可得y軸截距為1的直線。依樣品管的B0/B值,從標準曲線上得至相對應的濃度。再乘10得cAMPnmol/L。

3.7 正常值

(8.7±3.3)pmol/L。

3.8 化驗結果臨床意義

(1)增高:見于細菌性腦膜炎腦出血蛛網膜下腔出血腦梗死髓母細胞瘤腦囊蟲病脊髓壓迫癥產生實質性損害時。

(2)減低:見于腦萎縮或陳舊性腦損傷

腦脊液中cAMP變化較比血液中cAMP變化更具有特異性。

3.9 附注

cAMPT和cGMP參與多種生理功能物質代謝過程,很多生物性物質如激素神經遞質藥物毒素等,在體內作用過程中,均使細胞內cAMP與cGMP的水平發生變化。

3.10 相關疾病

腦出血、蛛網膜下腔出血、腦梗死、髓母細胞瘤、囊蟲病、脊髓壓迫癥

相關文獻

開放分類:化驗及醫學檢查體液和排泄物檢查腦脊液檢查
詞條腦脊液環磷酸腺苷
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參與討論
  • 評論總管
    2019/10/14 7:21:01 | #0
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