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免疫性疾病的實驗室檢查

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1 拼音

miǎn yì xìng jí bìng de shí yàn shì jiǎn chá

2 簡介

免疫學技術近年來有很大進展,在以沉淀、凝集溶解補體結合等傳統方法檢測體液抗原抗體的基礎上,發展了許多新技術(表1)。當代免疫學檢測方法則以各種標記技術為特征,具有敏感性高、微量定量、準確定位和分析性能,且可檢測免疫復合物和研究細胞免疫

3 循環免疫復合物測定

免疫復合物的形成在體內是經常發生的,可迅速被體內單核吞噬細胞吞噬、消化和清除。只有當形成的免疫復合物不易被清除或沉積于局部時,才有致病作用。免疫復合物本身不是引起組織損傷的主要因素,但它是引起免疫復合物性疾病的始動原因,最重要的生物學效應是激活補體,導致組織損傷。觀察血中循環免疫復合物的動態變化,有助于判斷血管炎系統性紅斑狼瘡腎臟病等自身免疫病活動性、預后和療效。除自身免疫病外,細菌感染,如亞急性細菌性心內膜炎麻風等;病毒感染,如流行性出血熱傳染單核細胞增多癥,病毒性肝炎等;原蟲感染,如瘧疾、血吸蟲病等; 以及某些腫瘤,都可出現循環免疫復合物。因特異性不強,現有的檢測方法無助于闡明病因,但可以判斷疾病的活動性、藥物療效和作用機制。

免疫復合物是異質性的,檢測方法多樣,已報告有30多種。由于每種方法檢出的免疫復合物不盡相同,且相互交叉重疊,因此最好使用幾種方法以便檢出某種疾病所固有的免疫復合物。免疫復合物檢測技術.是以其理化及生物學特性而分類的(表2)。

4 細胞免疫檢測技術

細胞免疫功能測定有體內及體外兩種方法,前者是通過遲發型皮膚變態反應,間接觀察T淋巴細胞對抗原、半抗原或絲裂原的應答效應;體外法多用檢查細胞表面標志(受體、分化抗原) 以進行分類、計數,并觀察絲裂原[植物血凝素(PHA)、刀豆素蛋白(ConA)]誘導的淋巴細胞轉化試驗或對相應靶細胞的細胞毒作用,以測定其免疫功能。最近開展檢測淋巴因子,特別是白細胞介素2,以期從細胞或分子水平上了解人體細胞免疫功能狀態。在此僅介紹細胞介導的細胞毒試驗,主要有以下三類。

4.1 T細胞介導的細胞毒反應

參與此反應的細胞為細胞毒性T細胞,又稱殺傷T細胞。檢測其細胞毒功能的有: ①51Cr釋放法: 鉻酸鈉(Na251CrO4)標記的靶細胞被CTL攻擊破裂時,胞漿核素可釋放于上清,測上清中核素,即為CTL的殺傷能力;②單細胞水平檢測法: CTL與相應靶細胞結合,形成CTL-靶細胞連接物,置瓊脂培養基中孵育,然后顯微鏡下計算結合物中臺盼藍著色(死細胞)靶細胞數得出殺傷率。

4.2 天然殺傷細胞的細胞毒試驗活性

有核素標記和細胞水平測定兩種方法。均需體外傳代腫瘤細胞作為靶細胞。常用方法為: ①125IUdR釋放法: 其基本原理是125IUdR中的碘與胸腺嘧啶分子中甲基的空間構型相似,因此125IUdR可作為一種類似物取代胸腺嘧啶參入到傳代腫瘤細胞的DNA分子上,參入后的125IUdR不會自動釋放出來,若釋放則反映靶細胞死亡。正常情況下,胸腺嘧啶參入DNA的能力比125IUdR強2~5倍。效靶細胞孵育15~20h,分別測定試驗管及自發釋放管上清及細胞部分放射性,計算特異細胞毒百分數。②雙靶細胞結合測定: 其特點是一種效應細胞結合兩個不同種類的靶細胞。由于外周血中的大顆粒淋巴細胞(LGL)可同時介導天然殺傷細胞(NKC)和抗體依賴細胞介導的細胞毒活性,采用NKC敏感的K562細胞株及NKC不敏感但有抗體包被的Raji細胞,即可觀察到LGL可同時結合這兩種細胞并將其殺死。

4.3 抗體依賴細胞介導的細胞毒(ADCC)試驗

本試驗為測定體內殺傷細胞(KC)活性。KC包括多形核中性粒細胞嗜酸粒細胞、單核細胞、巨噬細胞,以及某些淋巴細胞亞群,都具有Fc受體,橋聯抗體Fc分段,產生ADCC效應。測定法有: ①放射性核素釋放法: 以51Cr標記靶細胞(雞紅細胞或傳代腫瘤細胞)后,用適宜稀釋度的抗血清致敏靶細胞,最后加入效應細胞懸液。計算上清中的脈沖數作為反映ADCC活性的參數;②溶血空斑法:用賴氨酸使紅細胞形成單層,經抗靶細胞抗體致敏,置效應細胞懸液中培養,在光學顯微鏡下觀察空斑數目,以反映效應細胞數量。

5 免疫標記技術

應用各種標記物(熒光素、酶、放射性核素、生物素、抗生物素)、標記抗體、抗原或相關靶細胞,即能使難以觀察的抗原、抗體或細胞毒顯示出來,不僅能提高檢測的敏感性,對微量物質進行定性或定量檢測,而且結合顯微鏡和電鏡技術,能對所測樣本進行細胞或組織的準確定位,有助于免疫性疾病的診斷、預后判定及發病機理的探討。

5.1 免疫熒光技術

又稱熒光抗體技術。此法具有血清學的特異性,熒光色素的敏感性,并與顯微鏡法結合起來,可以特異、敏感、快速地檢出和定位某些未知抗原或抗體,特別是自身抗體。熒光抗體技術主要包括抗血清制備、抗體純化,制備熒光標記抗體,標記抗體純化,熒光標記抗體染色,顯微鏡標本制備及顯微鏡觀察。常用熒光抗體染色法有直接及間接法兩種,前者為熒光素標記待查抗原的特異性抗體,如狼瘡帶試驗等;后者是熒光素標記抗抗體。用間接免疫熒光法可以不斷發現新的自身抗體,現已檢出甲狀腺球蛋白抗體、甲狀腺微粒體抗體、甲狀腺第二膠質抗體、腎上腺抗體、胃壁細胞抗體、胃G細胞抗體、皮膚表皮間粘合質抗體、胰島細胞抗體唾液腺導管上皮細胞漿抗體、精子抗體、卵巢抗體、心肌抗體等器官特異性自身抗體。非器官特異性自身抗體有各種類型抗核抗體平滑肌抗體、橫紋肌抗體、神經髓鞘抗體、網狀纖維抗體,以及血液有形成分(紅、白細胞血小板等)的自身抗體。

5.2 放射性核素標記技術

用放射性核素標記抗體、抗原或相關靶細胞進行血清學或細胞毒(前述)試驗,敏感性高且較客觀,適用于微量物質的檢出或定量,能分析1pmol~1fmol水平的微量物質,已廣泛用于各種激素、藥物(地高辛嗎啡)、免疫球蛋白IgDIgE)、環核苷酸(cAMP、cGMP)的測定。可分為: ①放射免疫測定(RIA):將待測未標記抗原同已知標記抗原競爭有限量的抗體結合部位,反應達到平衡時,一部分標記抗原和未標記抗原與抗體結合,有些則游離存在,再用抗抗體把結合于抗體和游離的抗原分離開來,分別測其放射性。結合于抗體的放射性標記抗原的數量與待檢樣品中未標記抗原存在數量成反比關系,通過標準曲線可求得未知抗原數量;②免疫放射測定(IRMA): 此法與RIA不同點在于標記抗體,將過量的放射核素標記的純化抗體與待測抗原一起孵育,再加入到結合已知抗原的固相免疫吸附劑上,此過剩抗體可與免疫吸附劑結合,離心使之分離。未結合到吸附劑上的核標記抗體量與待測抗原量成正比,測定前者即可作為后者的指標。

5.3 免疫酶技術 (EIA)

此技術是把抗原抗體反應和酶的高效催化作用原理結合起來,其敏感度接近放射免疫測定,可直接肉眼觀察,亦可借助于酶標讀數器進行定量測定。EIA包括:①免疫過氧化物酶法:應用辣根過氧化物酶作為一種標記,通過酶與其底物間組織化學反應所產生的不溶性顏色產物,借助光學或電子顯微鏡,在細胞或亞細胞水平觀察待檢抗原或抗體。該法根據其作用方式,分為直接和間接兩種,可代替免疫熒光技術,作為免疫病理和自身免疫病的研究,檢查腎病患者活檢標本,天皰瘡和系統性紅斑狼瘡患者皮膚活檢標本中所結合的免疫球蛋白,以及自身抗體的檢測。②酶聯免疫吸附試驗法 (ELISA): 該法的主要原理為,抗原或抗體結合到固相載體的表面,仍保持其免疫活性,抗原或抗體與酶相結合所形成的結合物仍保持各自的免疫活性和酶的效應。當結合物與相應待查的抗體或抗原反應后,結合于免疫復合物上的酶使相應的底物水解、氧化或還原,從而產生有色物質。顏色反應的深淺與相應待測樣品中的抗體或抗原量成正比,可藉以判定測定結果。

近年來尚采用過氧化物酶-抗過氧化物酶(PAP)復合物及生物素-抗生物素系統用于酶技術,使其敏感性、準確性、快速性都得到很大提高。生物素是小分蛋白質,由卵黃囊提取,抗生物素是堿性糖蛋白,存在于雞蛋清中,正常情況下為四聚體,每一個單體結合一個分子生物素,故每個分子抗生物素可與4個分子生物素結合,兩者皆能標記熒光素、酶、鐵蛋白,生物素尚能與免疫球蛋白Fc分段結合。生物素-抗生物素系統檢測方法有: ①標記抗生物素-生物素技術(LAB): 抗體固相吸附+待檢抗原+生物素化抗體(經孵育和洗脫)+酶標抗生物素(孵育,洗脫)+底物(顯色); ②橋連抗生物素-生物素技術(BRAB):抗體固相吸附+待檢抗原+生物化抗體+抗生物素+酶標生物素+底物;③間接橋連抗生物素-生物素技術(IBRAB):主要用于切片染色,組織抗原+特異抗體+生物素標記抗抗體+抗生物素+酶標生物素+底物;④抗生物素-生物素復合物技術(ABC):組織抗原+特異抗體+生物素化抗抗體+抗生物素-生物素過氧化物酶復合物+底物。


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開放分類:內科-免疫內科
詞條免疫性疾病的實驗室檢查tatata创建
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  • 評論總管
    2021/4/14 12:08:21 | #0
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