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淋巴細胞毒試驗

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1 拼音

lín bā xì bāo dú shì yàn

2 英文參考

Lymphocytotoxicity test

3 概述

當特異的效應T淋巴細胞在體外與靶細胞接觸時,可表現出破壞和溶解靶細胞的特性,稱為淋巴細胞毒作用(cytotoxicity)。靶細胞可以是腫瘤細胞或其它組織細胞。淋巴細胞殺傷靶細胞的方式可通過直接殺傷或產生淋巴因子破壞靶細胞。

本試驗方法有形態檢查法和同位素釋放法兩種。前者不需特殊設備,只需用顯微鏡計數靶細胞的存活數,操作比較方便。后者則是用125I-脫氧脲嘧啶核苷51Cr標記靶細胞,以放射性同位素的釋放作為靶細胞受損傷的指標。此法需要特殊設備如液閃儀等,但可自動測量,結果重復性好。

4 淋巴細胞毒試驗的別名

淋巴細胞細胞毒試驗

5 檢查名稱

淋巴細胞毒試驗

6 分類

免疫學檢查 > 細胞免疫測定

7 淋巴細胞毒試驗的原理

各種貼壁生長的靶細胞,當被致敏的T淋巴細胞殺傷后可失去貼壁能力,故可從貼壁靶細胞數目的減少情況判斷淋巴細胞殺傷靶細胞的能力。

8 試劑

同形態檢查法和同位素釋放法。

9 操作方法

(1)靶細胞的接種:選用能貼壁生長的腫瘤細胞,用Hank液洗滌后經2.5g/L胰酶消化2~3min,倒去胰酶液(細胞仍貼在瓶壁),用Hank液輕洗細胞3次,倒去Hank液。用含10%~20%小牛血清的RPMI 1640液將貼壁細胞沖洗下來,用100目濾網過濾除去細胞團塊,制備成1×106/ml單個腫瘤細胞懸液,用滴管吸取細胞懸液滴入40孔培養板中,每孔1滴(約含100~150個細胞),置培養板于37℃含5% CO2孵箱中20h。取出培養板甩去其中培養液,瑞氏染色后計數每10孔中平均貼壁的腫瘤細胞數,如果兩組平均數相差>1/3,表明誤差太大不能使用,如果誤差不大其它各培養板可進行正式試驗。

(2)分離淋巴細胞:取受檢者肝素凝血3ml,用聚蔗糖-泛影葡胺分層液分離淋巴細胞后再用Hank液洗3次,然后用RPMI 1640液配成(2~3)×105/ml細胞懸液。

(3)細胞毒試驗:淋巴細胞和靶細胞按200∶1比例混合,每孔中加入(2~3)×104個淋巴細胞(0.1ml體積中)約每孔再加入含20%小牛血清的RPMI 1640液0.1ml,置培養板于37℃ 5%CO2孵箱中40h。取出培養板甩去培養液,瑞氏染色后于顯微鏡下計數培養板底部殘留的靶細胞數。

10 正常值

形態學檢查法:比較受檢組與對照組,P<0.05。

125I或51Cr法:P>0.05。

11 化驗結果臨床意義

本試驗可以作為體外測定腫瘤患者細胞免疫的指標;也可以通過測定機體免疫活性細胞殺傷腫瘤細胞的能力,來判斷腫瘤患者的預后;還可以鑒定淋巴細胞的功能性亞群。

12 附注

(1)在測定受檢者淋巴細胞攻擊腫瘤細胞的能力時,實驗組中加入腫瘤細胞和受檢者淋巴細胞,對照組中加入腫瘤靶細胞和培養液。若檢測其它樣品腫瘤抗原免疫原、治療藥物等與細胞免疫的關系,則應增設第3組,在此試驗組中先使淋巴細胞與待測樣品作用,繼經洗滌后再觀察此“致敏淋巴細胞”對腫瘤靶細胞的殺傷作用。此時前兩組成為對照組。

(2)靶細胞與淋巴細胞的活率要處于最佳狀態,一般要>90%。

(3)加入培養液中的小牛血清須先作毒性試驗

(4)接種靶細胞和淋巴細胞的計數要準確。

(5)實驗組和對照組應安排在同一塊板上以減少誤差。

(6)培養液的pH以6.8~7.2最為適宜。

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開放分類:化驗及醫學檢查免疫學檢查細胞免疫測定
詞條淋巴細胞毒試驗taozi创建
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  • 評論總管
    2019/10/16 4:19:01 | #0
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