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混合淋巴細胞培養

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1 拼音

hún hé lín bā xì bāo péi yǎng

2 概述

混合淋巴細胞培養(mixed lymphocyte culture,MLC)是指將受者和供者的淋巴細胞混合培養數天后,以反應細胞的增殖程度判斷兩者淋巴細胞相容性的試驗[1]。淋巴細胞相容性是組織相容性的指標之一[1]

3 操作名稱

混合淋巴細胞培養

4 英文名

mixed lymphocyte culture

5 混合淋巴細胞培養的別名

MLC

6 用品及準備

基本同淋巴細胞毒試驗

7 方法及內容

(1) 刺激細胞的處理:有兩種方法,一種是將受試細胞懸液用60CoX射線40Gy照射后的細胞直接接種。另一種是使用絲裂霉素處理。向細胞懸液內加入絲裂霉素(終濃度 40mg/ml),置37℃水浴30min,然后用RPM1640培養液洗滌3次。最后將細胞懸浮于1640培養液中計數,調整細胞數至1×106/ml。

(2) 準備微量加樣器,用75%酒精無菌雙蒸水、無菌生理鹽水依次各洗3遍。

(3) 預先準備無菌96孔圓底板,寫好標簽

(4) 按照雙向和單向混合培養的實驗設計接種細胞。①雙向微量混合淋巴細胞培養 (MLC-D)對照組,AABB每孔加A細胞 100μl或B細胞100μl,實驗組:AB每孔加A細胞50μl,B細胞50μl。②單向微量混合淋巴細胞培養(MLC-S)。對照組:AAm、BBm每孔加反應細胞50μl,自身刺激細胞50μl;實驗組:ABm、BAm每孔加反應細胞50μl,刺激細胞50μl,每孔總液量為100μl,每種組合 3~4個復管。

(5) 培養板置于37℃、含5%CO2濕潤空氣環境中培養5d。

(6) 5d后每孔加入2μl(36kBq)3H-TdR,繼續37℃培養。

(7) 18h后,用細胞收集器將放射性樣品收集于玻璃纖維濾紙上,水洗20s,空吸10s。

(8) 將樣品濾紙置于60~80℃烤箱烘干后,移至裝有2~3ml閃爍液的測量杯中,待測。

(9) 用β液體閃爍測量儀,測量每份樣品的放射性計數(CPM)。

8 結果判讀

計算刺激指數SI

因本底CPM值都控制在100以下,故本底CPM值可忽略不計。一般無關個體之間MLC的 SI>10。

9 正常值

形態計數法: 轉化率<10% 同位素計數法:比較cpm得出P>0.05 。

10 化驗結果意義

移植時,活體供腎者的轉化率應<10%;尸體供腎者的轉化率應為>10%。只能在同一批實驗中選用低反應配組。

11 化驗取材

血液

12 驗方

細胞免疫測定

13 化驗類別

免疫學檢查 > 細胞免疫測定

14 參考資料

《新編臨床檢驗與檢查手冊》、《新編化驗員工作手冊》

15 參考資料

  1. ^ [1] 中華人民共和國衛生部.WS/T 203—2001 輸血醫學常用術語[Z].2001-7-20.

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開放分類:化驗及醫學檢查輸血醫學人類白細胞抗原分型技術免疫學檢查細胞免疫測定
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  • 評論總管
    2019/7/22 15:54:45 | #0
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