混合淋巴細胞培養

2 概述

混合淋巴細胞培養（mixed lymphocyte culture，MLC）是指將受者和供者的淋巴細胞混合培養數天后，以反應細胞的增殖程度判斷兩者淋巴細胞相容性的試驗^[1]。淋巴細胞相容性是組織相容性的指標之一^[1]。

3 操作名稱

混合淋巴細胞培養

4 英文名

mixed lymphocyte culture

5 混合淋巴細胞培養的別名

MLC

6 用品及準備

基本同淋巴細胞毒試驗。

7 方法及內容

（1） 刺激細胞的處理：有兩種方法，一種是將受試細胞懸液用⁶⁰Co或X射線40Gy照射后的細胞直接接種。另一種是使用絲裂霉素處理。向細胞懸液內加入絲裂霉素（終濃度 40mg/ml），置37℃水浴30min，然后用RPM1640培養液洗滌3次。最后將細胞懸浮于1640培養液中計數，調整細胞數至1×10⁶/ml。

（2） 準備微量加樣器，用75%酒精、無菌雙蒸水、無菌生理鹽水依次各洗3遍。

（3） 預先準備無菌96孔圓底板，寫好標簽。

（4） 按照雙向和單向混合培養的實驗設計接種細胞。①雙向微量混合淋巴細胞培養 （MLC-D）對照組，AA、BB每孔加A細胞 100μl或B細胞100μl，實驗組：AB每孔加A細胞50μl，B細胞50μl。②單向微量混合淋巴細胞培養（MLC-S）。對照組：AAm、BBm每孔加反應細胞50μl，自身刺激細胞50μl；實驗組：ABm、BAm每孔加反應細胞50μl，刺激細胞50μl，每孔總液量為100μl，每種組合 3～4個復管。

（5） 培養板置于37℃、含5%CO₂濕潤空氣環境中培養5d。

（6） 5d后每孔加入2μl（36kBq）³H-TdR，繼續37℃培養。

（7） 18h后，用細胞收集器將放射性樣品收集于玻璃纖維濾紙上，水洗20s，空吸10s。

（8） 將樣品濾紙置于60～80℃烤箱烘干后，移至裝有2～3ml閃爍液的測量杯中，待測。

（9） 用β液體閃爍測量儀，測量每份樣品的放射性計數（CPM）。

8 結果判讀

計算刺激指數SI

因本底CPM值都控制在100以下，故本底CPM值可忽略不計。一般無關個體之間MLC的 SI＞10。

9 正常值

形態計數法： 轉化率＜10% 同位素計數法：比較cpm得出P＞0.05 。

10 化驗結果意義

腎移植時，活體供腎者的轉化率應＜10%；尸體供腎者的轉化率應為＞10%。只能在同一批實驗中選用低反應配組。

11 化驗取材

血液

12 化驗方法

細胞免疫測定

13 化驗類別

免疫學檢查 > 細胞免疫測定

14 參考資料

《新編臨床檢驗與檢查手冊》、《新編化驗員工作手冊》

15 參考資料

1. ^ [1] 中華人民共和國衛生部.WS/T 203—2001 輸血醫學常用術語[Z].2001-7-20.

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