2 概述
混合淋巴細胞培養(mixed lymphocyte culture,MLC)是指將受者和供者的淋巴細胞混合培養數天后,以反應細胞的增殖程度判斷兩者淋巴細胞相容性的試驗[1]。淋巴細胞相容性是組織相容性的指標之一[1]。
3 操作名稱
混合淋巴細胞培養
4 英文名
mixed lymphocyte culture
5 混合淋巴細胞培養的別名
MLC
6 用品及準備
基本同淋巴細胞毒試驗。
7 方法及內容
(1) 刺激細胞的處理:有兩種方法,一種是將受試細胞懸液用60Co或X射線40Gy照射后的細胞直接接種。另一種是使用絲裂霉素處理。向細胞懸液內加入絲裂霉素(終濃度 40mg/ml),置37℃水浴30min,然后用RPM1640培養液洗滌3次。最后將細胞懸浮于1640培養液中計數,調整細胞數至1×106/ml。
(2) 準備微量加樣器,用75%酒精、無菌雙蒸水、無菌生理鹽水依次各洗3遍。
(3) 預先準備無菌96孔圓底板,寫好標簽。
(4) 按照雙向和單向混合培養的實驗設計接種細胞。①雙向微量混合淋巴細胞培養 (MLC-D)對照組,AA、BB每孔加A細胞 100μl或B細胞100μl,實驗組:AB每孔加A細胞50μl,B細胞50μl。②單向微量混合淋巴細胞培養(MLC-S)。對照組:AAm、BBm每孔加反應細胞50μl,自身刺激細胞50μl;實驗組:ABm、BAm每孔加反應細胞50μl,刺激細胞50μl,每孔總液量為100μl,每種組合 3~4個復管。
(5) 培養板置于37℃、含5%CO2濕潤空氣環境中培養5d。
(6) 5d后每孔加入2μl(36kBq)3H-TdR,繼續37℃培養。
(7) 18h后,用細胞收集器將放射性樣品收集于玻璃纖維濾紙上,水洗20s,空吸10s。
(8) 將樣品濾紙置于60~80℃烤箱烘干后,移至裝有2~3ml閃爍液的測量杯中,待測。
(9) 用β液體閃爍測量儀,測量每份樣品的放射性計數(CPM)。
8 結果判讀
計算刺激指數SI
因本底CPM值都控制在100以下,故本底CPM值可忽略不計。一般無關個體之間MLC的 SI>10。
9 正常值
形態計數法: 轉化率<10% 同位素計數法:比較cpm得出P>0.05 。
10 化驗結果意義
腎移植時,活體供腎者的轉化率應<10%;尸體供腎者的轉化率應為>10%。只能在同一批實驗中選用低反應配組。
11 化驗取材
12 化驗方法
細胞免疫測定
13 化驗類別
14 參考資料
《新編臨床檢驗與檢查手冊》、《新編化驗員工作手冊》
15 參考資料
- ^ [1] 中華人民共和國衛生部.WS/T 203—2001 輸血醫學常用術語[Z].2001-7-20.