熱詞榜

工具酶

廣告
廣告
醫學百科提醒您不要相信網上藥品郵購信息!

1 拼音

gōng jù méi

2 注解

工具酶是基因重組技術不可缺少的工具。主要有限制性內切酶、連接酶、核酸聚合酶、逆轉錄酶核酸酶等。

限制性內切酶有Ⅰ型和Ⅱ型限制性DNA內切酶之分,Ⅱ型能嚴格識別核酸序列,并在識別區內特定的核苷酸處切開DNA雙鏈。故通常所指都是Ⅱ型限制性DNA內切酶。識別分四核苷酸和六核苷酸,其序列旋轉對稱。切口分開端和粘端,產生3′-OH和5′-P末端。內切酶品種多,使用時應注意溫度、緩沖液用量(一般1μg DNA/2-5單位酶)等反應條件。

連接酶有T4噬菌體DNA連接酶、T4噬菌體RNA連接酶、大腸埃希菌DNA連接酶等。DNA連接酶可連接平端,也連接粘端。反應需有Mg2 和ATP存在,pH7.5-7.6。最適溫度37℃,30℃以下活性明顯下降,但考慮到被連接DNa 的穩定性和粘性末端的退火溫度,一般平端連接用20-25℃,粘端連接用12℃左右。

聚合酶有DNA聚合酶(以DNA為模板合成DNA大腸埃希菌DNA聚合酶Ⅰ,大腸埃希菌DNA聚合酶Ⅰ大片段(Klenow大片段),T4或T7噬菌體DNA聚合酶等);RNA聚合酶(以DNA為模板合成RNA,T7或T3噬菌體RNA聚合酶);逆轉錄酶(以RNA為模板合成DNA,除RNA病毒中發現外,發現大腸埃希菌DNA聚合酶Ⅰ和Taq DNA聚合酶都有逆轉錄活性)。

大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ具有5′→3′聚合酶活性和5′→3′,3′→5′外切酶活性。Klenow片段是DNA聚合酶Ⅰ被枯草桿菌作用產生的一個大片段,有5′→3′聚合酶和5′→3′外切酶活性,無3′→5′外切酶活性。可用于缺口翻譯(Nick translation)法標記核酸,也可用于DNA序列測定,修補DNA鏈等。

核酸酶有DNase、RNase、核酸酶S1等,可水解相應的DNA和RNA,核酸酶S1可降解單鏈DNA和RNA,用量增大也可降解雙鏈核酸。它可用于切去ds-cDNA合成中產生的發夾環。

末端轉移酶在Mg2 存在下,選擇3′-OH端單鏈DNA為引物加成核苷酸,在Co2 存在下,選擇3′-OH端雙鏈DNA為引物加成核苷酸,形成多聚核苷酸尾。常用于核酸末端標記和核酸連接的互補多聚尾(連接器)。

堿性磷酸酶去除5′-P,可防止二分子DNA片段5′端P基團自身空間障礙,影響DNA分子之間的連接,一般用堿性磷酸酶處理載體DNA除去5′端P基團,在連接酶作用下目的基因的5′端P先與載體3′端OH連接,再通過復制修復另一條鏈,使二條鏈完全連接。該方法大大提高了連接效率。

相關文獻

詞條工具酶banlang创建
參與評價: ()

相關條目:

參與討論
  • 評論總管
    2018/12/14 23:23:35 | #0
    歡迎您對工具酶進行討論。您發表的觀點可以包括咨詢、探討、質疑、材料補充等學術性的內容。
    我們不歡迎的內容包括政治話題、廣告、垃圾鏈接等。請您參與討論時遵守中國相關法律法規。
抱歉,功能升級中,暫停討論
特別提示:本文內容為開放式編輯模式,僅供初步參考,難免存在疏漏、錯誤等情況,請您核實后再引用。對于用藥、診療等醫學專業內容,建議您直接咨詢醫生,以免錯誤用藥或延誤病情,本站內容不構成對您的任何建議、指導。

本頁最后修訂于 2010年3月17日 星期三 22:11:19 (GMT+08:00)
關于醫學百科 | 隱私政策 | 免責聲明
京ICP備13001845號

京公網安備 11011302001366號


鏈接及網站事務請與Email:聯系 編輯QQ群:8511895 (不接受疾病咨詢)