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端粒酶活性

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1 拼音

duān lì méi huó xìng

2 英文參考

Telomerase activity

3 概述

端粒真核生物染色體末端的一種特殊結構,由一富含鳥嘌呤的重復DNA序列及其相關蛋白組成。端粒是保護染色體末端穩定必不可少的結構。端粒長度的維持需要端粒酶活性的存在。永生細胞腫瘤細胞能夠長期生存,端粒酶起到了重要的作用。端粒酶是由RNA和蛋白體組成的復合體,屬一種專一的依賴RNA的逆轉錄酶,能以自身的RNA為模板,從頭合成染色體末端的端粒DNA,彌補細胞分裂時端粒DNA的丟失,維持端粒的長度,保持染色體的動態平衡,使細胞獲得永生化。自1994年Kim建立了高敏感度的、以PCR為基礎的檢測端粒酶的方法以來,端粒酶引起了人們的廣泛關注。人們發現,端粒酶與細胞的增生、分化和不死性有著極為密切的關系,已成為目前腫瘤和衰老基礎研究的熱點之一。

4 端粒酶活性的醫學檢查

4.1 檢查名稱

端粒酶活性

4.2 分類

血清學檢查 > 腫瘤免疫檢測

4.3 端粒酶活性的測定原理

聚合酶鏈反應技術:聚合酶鏈反應是在體外進行的由3個基本步驟組成的循環反應。第一步變性:將所有擴增的基因片段加熱,使雙鏈之間的氫鍵斷裂,分解成兩條單核苷酸鏈;第二步退火:當溫度下降時,化學合成的寡聚核苷酸引物即與所要擴增基因兩側的DNA相合;第三步延伸:在合適緩沖液,即鎂離子和4種脫氧核苷酸存在的條件下,DNA聚合酶能忠實地根據模板堿基序列合成互補鏈,從引物的3'端進行延伸,合成的方向為5'→3',從而合成與原來結構相同的基因片段2分子。3個步驟組成1個循環,每循環1次DNA分子數按指數倍增。

4.4 試劑

聚合酶鏈反應的基本條件包括純化的DNA或RNA基因組,用于合成DNA的單核苷酸,寡聚核苷酸引物DNA聚合酶,各種緩沖液,快速改變溫度的能力及專用檢測系統

(2)DNA/RNA的抽提與純化:同本節核酸探針技術中的DNA/RNA的抽提與純化。

(2)引物的選擇:首先要知道待擴增基因片段兩側DNA的序列,然后用化學合成法合成一對與兩側DNA序列互補的寡聚核苷酸為引物,長度一般為20~30核苷酸。引物的選擇應注意下列幾點:①其序列是所要擴增基因特異的;②堿基隨機分布,避免成堆的嘌呤或嘧啶;③不會自體形成二級結構;④一對引物不應自身互補。

(3)DNA聚合酶:選用Taq-DNA聚合酶,它能耐高溫,產量高,擴增長度可達10kb以上,加一次酶可進行不斷循環。

4.5 操作方法

基因組DNA為0.1μg;緩沖液含50mmol/L氯化鉀,10mmol/L Tris-HCl(pH8.4),1.5mmol/L氯化鎂,100μg明膠;每一引物為0.25μmol/L;dATP,dCTP,dGTP,dTIP各為200μmol/L;DNA聚合酶為2.5U,終體積為100μl。加數滴液體石蠟防止蒸發

反應周期:①變性:90℃ 30~60s;②引物和模板的退火溫度:40~60℃ 30~60s;③延伸:72℃ 1~2min。經反復循環30~40次,最后1次72℃引物延伸7min后終止。除去液體石蠟后,產物可供分析。經瓊脂凝膠電泳后,用溴乙錠染色,經紫外燈照射可見預料擴增長度的熒光條帶。產物也可與放射標記或非放射標記的寡聚核苷酸探針行Southern印跡雜交或點漬印跡雜交。如用PCR自動儀則更為方便,將反應試劑、DNA模板及Taq-DNA聚合酶加入試管后,放進已調好程序,即所需變性→退火→延伸各自的溫度和時間及循環次數的自動儀中進行反應,即可獲得滿意的擴增產物。

4.6 正常值

陰性

4.7 化驗結果臨床意義

(1)肝癌患者有較高的端粒酶陽性率(85%),端粒酶活性陽性者AFP水平明顯高于端粒酶活性陰性者。端粒酶活性與腫瘤大小組織學分級及腫瘤轉移無顯著相關。端粒酶有可能成為診斷肝癌的腫瘤標志物

(2)端粒酶在大多數惡性腫瘤組織有較高水平表達,如神經母細胞瘤(94%)、乳腺癌(93%)、大腸癌(93%)、胃癌(85%)、前列腺癌(84%)、肺癌(80%)等。端粒酶活性與腫瘤的臨床分期及預后密切相關。因此,端粒酶是目前最特異和具有普遍性的腫瘤標記物。

(3)在少數良性病變(如肝炎肝硬化、良性腦膜瘤等)組織中可有很弱的端粒酶活性。

4.8 附注

近年來,“端粒、端粒酶假說”已被越來越多的研究所證實,以端粒酶活性水平為腫瘤診斷的生物標志和預后指標。

4.9 相關疾病

神經母細胞瘤、乳腺癌、大腸癌、胃癌、前列腺癌、肺癌、肝硬化、腦膜瘤

相關文獻

開放分類:化驗及醫學檢查血清學檢查腫瘤免疫檢測
詞條端粒酶活性tatata创建
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  • 評論總管
    2020/7/12 8:08:08 | #0
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