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WS/T 553—2017 人群維生素A缺乏篩查方法

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1 拼音

WS/T 553—2017 rén qún wéi shēng sù Aquē fá shāi chá fāng fǎ

2 英文參考

Method for Vitamin A deficiency screening

3 基本信息

ICS 11.020

C 55

中華人民共和國衛生行業標準 WS/T 553—2017《人群維生素A缺乏篩查方法》(Method for Vitamin A deficiency screening)由中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會于2017年08月01日發布,自2018年02月01日起實施。

4 前言

本標準按照GB/T 1.1—2009給出的規則起草。

本標準主要起草單位:中國疾病預防控制中心營養與健康所、首都兒科研究所、北京大學醫學部公共衛生學院、浙江省疾病預防控制中心。

本標準主要起草人:霍軍生、樸瑋、丁鋼強、孫靜、黃建、王麗娟、唐艷斌、陳頔、李瑾、高潔、張霆、林曉明、李可基、章榮華

5 標準正文

人群維生素A缺乏篩查方法

5.1 1 范圍

本標準規定了人群維生素A缺乏篩查的指標、檢測方法及相應的維生素A缺乏的判定界值。

本標準適用于人群維生素A缺乏的判定,個體維生素A缺乏的臨床診斷需要結合臨床。

5.2 2 規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

WS/T 225 臨床化學檢驗血液標本的收集與處理

5.3 3 術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

維生素A  vitamin A

視黃醇 retinol

紫蘿酮衍生物的總稱。一種脂溶性維生素。有維生素A1及維生素A2兩種

3.2

維生素A缺乏 vitamin A deficiency

人體內維生素A水平不足以維持正常生理功能血清血漿)中視黃醇水平兒童(6歲及以下)低于0.35μmol/L,6歲以上兒童及成人低于0.70μmol/L,并可能出現眼、皮膚等的病理改變。

3.3

維生素A邊緣型缺乏 marginal vitamin A deficiency

人體內維生素A水平可以維持正常生理功能,但是補充維生素A后血清(血漿)中視黃醇水平上升。

5.4 4 人群維生素A邊緣型缺乏和缺乏判定標準

以單位體積血清(血漿)視黃醇含量作為維生素A缺乏篩查指標,當實測的血清(血漿)視黃醇含量小于相應參考值時,即判定為相應維生素A邊緣型缺乏或者缺乏,判定指標及判定界值見表1。

表1  人群維生素A邊緣型缺乏和缺乏的判定指標及判定界值


血清(血漿)視黃醇含量

維生素A狀況

邊緣型缺乏/(μmol/L)或(μg/mL)

缺乏/(μmol/L)或(μg/mL)

兒童(6歲及以下)

≥0.35~<0.70,  ≥0.10~<0.20

<0.35,   <0.10

6歲以上兒童及成人

≥0.70~<1.05,  ≥0.20~<0.30

<0.70,    <0.20

注:轉換系數1mol視黃醇=286.45 g視黃醇。

5.5 5 人群維生素A缺乏公共衛生問題等級判定標準

在1歲及以上被評估人群中,計算血清(血漿)視黃醇含量<0.70μmol/L人數比例,根據維生素A缺乏公共衛生問題判定標準對該人群的維生素A缺乏的公共衛生問題嚴重程度進行判定。判定問題等級及判定值見表2。

表2 維生素A缺乏公共衛生問題判定標準

公共衛生問題等級

流行率

輕度

≥2%~≤10%

中度

>10%~<20%

重度

≥20%

注1:適用于年齡≥1歲人群。

注2:維生素A缺乏判定標準<0.70 μmol/L

5.6 6 血清(血漿)維生素A測定方法

按附錄A規定的血清(血漿)視黃醇測定方法-高效液相色譜法HPLC)進行測定。

6 附錄

6.1 附錄A(規范性附錄)血清(血漿)視黃醇測定方法-高效液相色譜法(HPLC)

6.1.1 A.1 原理

血清(血漿)中加入內標視黃醇醋酸酯,經正己烷萃取處理,使用高效液相色譜C18反向柱進行分離后,經紫外檢測器進行定量檢測。

6.1.2 A.2 試劑和材料

除非另有規定,本方法所用均為色譜純試劑和蒸餾水或相當純度的水(H2O)。

A.2.1 無水乙醇(C2H6O)。

A.2.2 甲醇( CH4O)。

A.2.3 正己烷(C6H14)。

A.2.4 硝酸(HNO3)。

A.2.5 視黃醇標準品(C20H30O)。

A.2.6 視黃醇醋酸酯標準品(C22H32O2)。

A.2.7 高純氮氣(N2)。

6.1.3 A.3 儀器

A.3.1 高效液相色譜儀帶紫外分光檢測器。

A.3.2 氮吹儀。

A.3.3 離心機:轉速≥5000 r/min。

A.3.4 天平:感量為0.1 mg。

A.3.5 紫外分光光度計。

6.1.4 A.4 樣本采集和保存

參照WS/T 225進行靜脈血采集、血清(血漿)分離和血樣的保存

注:血樣的采集和前期處理均須在避光或紅光環境下進行,以免血樣中視黃醇的含量發生變化。

6.1.5 A.5 分析步驟

6.1.5.1 A.5.1 視黃醇標準品儲備液的配制

A.5.1.1 取一定量的視黃醇標準品,放入10 mL容量瓶中,用少量無水乙醇充分溶解后定容至10 mL,制成視黃醇標準品儲備液。

A.5.1.2 吸取100μL視黃醇標準品儲備液,置于10 mL容量瓶中,加入無水乙醇定容到10 mL(重復兩次)。

A.5.1.3 采用紫外分光光度計于325 nm波長處,檢測視黃醇標準品儲備液的含量,空白試劑為無水乙醇。用比吸光系數計算出標準儲備液中視黃醇的濃度。

A.5.1.4 儲備液中視黃醇含量按式(A.1)計算。

公式.PNG

式中:

C1——視黃醇標準品儲備液濃度,單位為毫克每毫升( mg/mL);

A——視黃醇的平均紫外吸光值;

E——視黃醇的1%比吸光系數(視黃醇為1835);

V——加入標準品儲備液的量,單位為微升(mL);

10.00——標準品儲備液最終稀釋體積,單位為毫升(mL)。

重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示,結果保留三位有效數字

注1:視黃醇標準品儲備液須20℃以下避光儲存,臨用前需用紫外分光光度法標定其準確濃度。

注2:配制所用的所有容器均經硝酸浸泡24h,并完全洗凈晾干。

6.1.5.2 A.5.2 視黃醇醋酸酯內標的配制

A.5.2.1  采用感量為0.1 mg天平,準確稱量視黃醇醋酸酯標準品82.0 mg,倒入10 mL容量瓶中,無水乙醇充分溶解后定容至10 mL,配制成視黃醇醋酸酯內標濃溶液

A.5.2.2 使用高效液相色譜儀,在325 nm處檢測視黃醇醋酸酯內標濃溶液的峰面積后,用無水乙醇稀釋至濃度約為6μg/mL的視黃醇醋酸酯內標工作溶液。

6.1.5.3 A.5.3 標準曲線的繪制
6.1.5.3.1 A.5.3.1 視黃醇標準曲線的配制

分別吸取標定的視黃醇標準儲備液置于10 mL棕色容量瓶中,再加入等體積視黃醇醋酸酯內標工作液置于棕色容量瓶中,用無水乙醇稀釋至刻度,使視黃醇標準液的濃度分別為1.00μg/mL,0.50μg/mL,0.30μg/mL,0.20μg/mL,0.10μg/mL和0.05μg/mL。待測,上機。

注:所有標準品均保存于-20℃低溫冰箱中。

6.1.5.3.2 A.5.3.2 高效液相色譜參考條件

高效液相色譜參考條件應符合如下要求:

——預柱:4.0 mm×4.5 cm,10μm。

——分析柱:C18柱,4.6 mm×25.0 cm,5μm。

——流動相:甲醇:水=98:2。流動相使用前充分混勻,并在臨用前脫氣

——流速:1 mL/min。

——檢測波長:325 nm。

——柱溫:28℃±1℃。

——進樣量:20μL。

6.1.5.3.3 A.5.3.3 視黃醇標準曲線的繪制

分別取視黃醇標準系列溶液由低至高進行測定,每次測定均加入與標準品中內標濃度相同的視黃醇醋酸酯內標進行測定。以視黃醇標準系列溶液濃度為橫坐標,以視黃醇峰面積與視黃醇醋酸酯內標的峰面積之比為縱坐標繪制標準曲線,進行線性回歸(r2≥0.999)。內標測定兩個平行樣。

6.1.5.4 A.5.4 血樣中視黃醇的測定

A.5.4.1 凍存血清(血漿)血樣需要在室溫,避光條件下進行自然解凍,并震蕩混勻。新鮮血清(血漿)血樣可直接進行下一步操作。

A.5.4.2 吸取血清(血漿)和內標各100μL至1.5 mL離心管中,振蕩混勻30 s,加1 mL正己烷萃取,振蕩1min。

A.5.4.3 5000 r/min下離心5 min,取出后吸取上清液800μL至另一1.5 mL離心管中。

A.5.4.4 氮氣吹干后加入200μL乙醇溶解,振蕩混勻30 s,離心5 min,5000 r/min。

A.5.4.5 吸取150μL樣本溶液,使用高效液相色譜儀進行檢測。根據色譜圖中樣品視黃醇的峰面積與視黃醇醋酸酯內標峰面積的比值,在標準曲線上求出樣品中視黃醇的含量。

7 標準全文下載

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  • 評論總管
    2018/6/25 6:38:16 | #0
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