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WS/T 421—2013 抗酵母樣真菌藥物敏感性試驗 肉湯稀釋法

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1 拼音

WS/T 421—2013 kàng jiào mǔ yàng zhēn jūn yào wù mǐn gǎn xìng shì yàn ròu tāng xī shì fǎ

2 英文參考

Antifungal susceptibility testing of yeasts—Broth dilution method

ICS 11.020

C 50

中華人民共和國衛生行業標準 WS/T 421—2013《抗酵母真菌藥物敏感性試驗 肉湯稀釋法》(Antifungal susceptibility testing of yeasts—Broth dilution method)由中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會于2013年07月16日發布,自2013年12月01日起實施。

3 前言

本標準按照GB/T 1.1—2009給出的規則起草。

本標準起草單位:衛生部臨床檢驗中心、北京大學第一醫院.北京大學人民醫院、首都醫科大學附屬北京友誼醫院、中國醫學科學院北京協和醫院、衛生部北京醫院、華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院。

本標準主要起草人:胡繼紅、李若瑜、張楠、王輝、蘇建榮、徐英春、胡云建、孫自鏞。

抗酵母樣真菌藥物敏感性試驗

肉湯稀釋法

4 1 范圍

本標準規定了用經典的宏量肉湯稀釋方法(Broth Macrodilution method)檢測抗酵母樣真菌的最小抑菌濃度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC)的參考方法,并推薦了與本參考方法的結果具有良好一致性的微量肉湯稀釋方法(Broth Microdilution method)。

本標準適用于酵母及酵母樣真菌(引起的深部真菌感染)的藥物敏感性試驗,包括念珠菌屬Candida spp.(含光滑念珠菌C. glabrata)和新生隱球菌Cryptococcus neoformens。不適用雙相真菌,如皮炎芽生菌Blastomyces dermatitidis莢膜組織胞漿菌Histoplasma capsulatum莢膜亞種

5 2 術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

2.1

抗真菌藥物 antifungal agents

用于人體內對真菌具有抑制生長或殺滅作用的生物物質、半合成或合成物質,不包括消毒劑滅菌劑防腐劑

2.2

最小抑菌濃度 minimal inhibitory concentration;MIC

瓊脂或肉湯稀釋法中,抗菌藥物能抑制微生物生長的最低濃度。

2.3

折點 breakpoint

臨床上能將真菌分為敏感、中介耐藥的特定MIC值。

折點系綜合體外MIC值、PK/PD數據、臨床療效而得出,還可隨環境改變而變化(如感染部位、常規藥物劑量的改變、使用途徑及次數的改變)。

2.4

敏感 susceptible;S

此濃度在體外檢測中能抑制真菌生長,當使用推薦劑量時在臨床治療中很有可能取得成功。

2.5

中介 intermediate,I

菌株對常規用藥時體液和組織中能達到的藥物濃度反應率低于敏感株,和(或)不能被清楚地劃分為“敏感”或“耐藥”。在體外真菌可被抑制生長,此濃度臨床治療效果不肯定。如為藥物聚集部位或高劑量使用,則臨床治療有效。該范圍可作為一緩沖區,避免由于微小、不可控的技術因素導致嚴重解釋偏差。

2.6

耐藥 resistant;R

當使用推薦劑量時在臨床治療中很有可能失敗。

2.7

劑量依賴性敏感 susceptible-dose dependent;S-DD

當使用比常規用藥更高劑量或更高血藥濃度時能夠取得療效。

2.8

非敏感 non-susceptible;NS

當前僅有敏感解釋,但無中介或耐藥解釋類型的微生物,多用于仍未遇到耐藥菌株的新抗菌藥物。

2.9

效價 potency

抗菌藥物巾具有抗菌活性的部分,通過同類標準物質測定得出。單位表示為mg/g、IU/g.或用百分比表示。

2.10

質量控制 quality control;QC

為保證檢測的準確性和可重復性而采取的方法或技術。

6 3 抗真菌藥物

6.1 3.1 抗真菌藥物標準品或參考品

抗真菌藥物標準品或參考品可從藥物生產廠家直接購買得到。使用有效期內的標準品,在廠家推薦的條件下貯存。當從低溫下取出藥物對,需恢復到室溫后再開瓶。藥物稱量按照配制貯存液的濃度計算.濃度為檢測時使用濃度的100倍。稱量應在分析天平上進行,天平應定期校準

6.2 3.2 稱量藥物

計算藥物質量及稀釋液體積見式(1)、式(2):

捕獲.PNG

式中:

m——藥物的質量,單位為毫克(mg);

ρ——藥物的濃度·單位為微克每毫升(μg/mL);

τ——藥物的效價。單位為微克每毫克(μg/mg):

V一一一藥物的體積,單位為毫升(mL)。

6.3 3.3 藥物儲存液(母液

6.3.1 3.3.1 溶劑

溶解時,一些藥物需使用非水溶劑溶解(見表1)。溶劑的信息可參考廠家說明書。溶劑包括(分析級別):二甲基亞砜(DMSO)、乙醇聚乙二醇、羧甲基纖維素

表1 抗真菌藥物儲存液使用的溶劑、稀釋液和檢測范圍

抗真菌藥物

溶劑a

稀釋液

檢測范圍μg/mL

兩性霉索B

DMSOb

培養基

0.0312~16

氟康唑

培養基

0.125~64

伊曲康唑

DMSOb

培養基

0.0156~8

表1(續)

抗真菌藥物

溶劑a

稀釋液

檢測范圍μg/mL

伏立康唑

DMSOb

培養基

0.0156~8

泊沙康唑

DMSOb

培養基

0.0156~8

氟胞嘧啶

培養基

0.125~64

卡泊芬凈

培養基

0.0312~16

米卡芬凈

培養基

0.0312~16

安尼芬凈

DMSOb

培養基

0.0312~16

a某些溶劑存在潛在毒性,使用前應咨詢制造商。

b DMSO表示二甲基亞砜。

c培養基指RPMI-1640肉湯培養基,配制見表2。

表2 RPMI-1640肉湯培養基1 L制備步驟

步驟

過程

1

10.4 g RPMI-1640肉湯干粉,34.53 g MOPSa 緩沖液,溶解于900 mL蒸餾水

2

加入MOPS(終濃度為0.165 mol/L),攪拌至溶解

3

使用1 mol/L氫氧化鈉調pH至7.0(25℃)

4

補水至1L

5

過濾消毒儲存在4℃備用

a MOPS表示3-(N-嗎啡啉)丙磺酸(3-N-morpholino propane sulfonic acid)。

6.3.2 3.3.2 過濾

通常認為儲存液是無菌的,當有特殊要求時應進行膜過濾,但應避免使用紙張、石棉玻璃濾器等具有吸附抗真菌藥物的材質。

6.3.3 3.3.3 保存

儲存液應分裝在塑料管中密封保存在-60℃環境中,保存溫度不能高于-20℃。應在從冰箱中取出的當天使用,現用現取,未用完的應丟棄。大多數藥物的儲存液在-60℃可保存6個月。

6.4 3.4 藥物稀釋液

6.4.1 3.4.1 水溶性抗真菌藥物

對于溶于水的抗真菌藥物,用稀釋液(RPMI-1640肉湯)將100倍終濃度儲存液10倍稀釋,最后與菌液1:9混合,步驟見表3。

表3 水溶性抗真菌藥物稀釋步驟

步驟

濃度

μg/mL

來源

體積

mL

培養基

mL

中間濃度

μg/mL

終濃度1:10

μg/mL

lOg2

1

5120

儲存液

1.0

7

640

64

6

2

640

步驟1

1.0

1.0

320

32

5

3

640

步驟1

1.0

3.0

160

16

4

4

160

步驟3

1.0

1.0

80

8

3

5

160

步驟3

0.5

1.5

40

4

2

6

160

步驟3

0.5

3.5

20

2

1

7

20

步驟6

1.0

1.0

10

1

0

8

20

步驟6

0.5

1.5

5

0.5

-1

9

20

步驟6

0.5

3.5

2.5

0.25

-2

10

2.5

步驟9

1.0

1.0

1.25

0.125

-3

11

2.5

步驟9

0.5

1.5

0.625

0.0625

-4

12

2.5

步驟9

0.5

3.5

0.3125

0.03125

-5

6.4.2 3.4.2 非水溶性抗真菌藥物

對于不溶于水的抗真菌藥物(如兩性霉素B、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、阿尼芬凈),需先用合適的溶劑配制終濃度100倍的儲存液,再用RPMI-1640肉湯10倍稀釋成終濃度的10倍后,最后與菌液1:9混合,步驟見表4。

表4 非水溶性抗真菌藥物稀釋步驟

步驟

濃度μg/mL

來源

體積mL

溶劑(如DMSOa

mL

中間濃度μg/mL

終濃度1: 100

μg/mL

Log2

1

1600

儲存液

1600μg/mL

16

4

2

1600

儲存液

0.5

0.5

800

8

3

3

1600

儲存液

0.5

1.5

400

4

2

4

1600

儲存液

0.5

3.5

200

2

1

5

200

步驟4

0.5

0.5

100

1

0

6

200

步驟4

0.5

1.5

50

0.5

-1

7

200

步驟4

0.5

3.5

25

0.25

-2

8

25

步驟7

0.5

0.5

12.5

0.125

-3

9

25

步驟7

0.5

1.5

6.25

0.0625

-4

10

25

步驟7

0.5

3.5

3.13

0.0313

-5

a DMSO表示二甲基亞砜。

7 4 培養基

7.1 4.1 RPMI-1640肉湯培養基

推薦使用RPMI-1640肉湯培養基,若無RPMI-1640干粉,配方見附錄A。

7.2 4.2 含2%葡萄糖的RPMI-1640肉湯培養基

微量肉湯稀釋法推薦使用葡萄糖含量為2%的RPMI-1640肉湯培養基,配方見表5。

表5 含2%葡萄糖改良RPMI-1640肉湯培養基配方表

組分

1倍濃度

2倍濃度

蒸餾水

900 mL

900 mL

RPMI-1640干粉

10.4 g

20.8 g

MOPS

34.53 g

69.06 g

葡萄糖

18 g

36 g

7.3 4.3 特殊改良培養基

兩性霉素B可使用Antibiotic Medium 3(AM3)培養基,并補充葡萄糖終濃度至2%,可提高耐藥檢出率,但此培養基未經標準化并存在批間差異。新生隱球菌使用Yeast Nitrogen Base可促進新生隱球菌生長,并提高抗菌藥物的MIC值。

8 5 宏量肉湯稀釋法操作步驟

8.1 5.1 菌懸液的制備

酵母樣真菌應在沙氏培養基(SDA),或馬鈴薯葡萄糖培養基(PDA) 35℃培養24 h.新生隱球菌應培養48 h。挑選直徑1 mm左右的幾個相似菌落,用5 mL 0.85%鹽水制成0.5麥氏單位菌懸液(用于對照的0.5麥氏單位硫酸鋇濁度標準管配制見附錄B),或使用濁度儀配制濃度為1×106CFU/mL~5×106CFU/mL菌懸液,振蕩器上持續混勻15 s,再用0.85%生理鹽水進行1:100倍稀釋,然后用RPMI-1640肉湯進行1: 20倍稀釋,得到終濃度為5×102CFU/mL~2.5×103CFU/mL。

8.2 5.2 接種

在15 min內(在4℃可延長至2 h)將0.9 mL配制好的菌懸液和0.1 mL稀釋藥液加入管中。對照管加入0.9 mL菌懸液和0.1 mL使用的稀釋液(RPMI-1640肉湯培養基)。

8.3 5.3 培養

將培養管置于35℃溫箱中培養,酵母樣真菌應培養24 h~48 h,新生隱球菌則應70 h~74 h。注意培養過程中避免震搖試管。

8.4 5.4 結果判讀

8.4.1 5.4.1 評分標準

判讀結果時,將各濃度管內的真菌生長情況與對照管比較,通過評分得出MIC值,評分標準:

——0完全清亮;

——1輕微模糊;

——2濁度顯著降低;

——3濁度輕微降低;

——4濁度沒有變化。

8.4.2 5.4.2 兩性霉素B

生長終點判斷標準為100%抑制(評分為0,完全清亮)。

8.4.3 5.4.3 氟胞嘧啶和吡咯

氟胞嘧啶5-Flucytosine和吡咯類azoles抗真菌藥物的生長終點判讀標準為抑制50%的生長(評分為2,濁度顯著降低)。

8.4.4 5.4.4 棘白菌素類

棘白素類Echinocandin抗真菌藥物的生長終點判讀標準為50%抑制(評分為2,濁度顯著降低)。

8.5 5.5 結果解釋

氟康唑Fluconazole、伏立康唑Voriconazole、兩性霉素B、伊曲康唑、氟胞嘧啶、安尼芬凈、卡泊芬凈Caspofungin以及米卡芬凈Micafungin結果解釋見附錄C。

9 6 微量肉湯稀釋法操作步驟

9.1 6.1 菌懸液的制備

按5.1方法培養和制備0.5麥氏單位菌懸液,得到濃度為1×106CFU/mL~5×106CFU/mL。之后震蕩混勻15 s,用含2%葡萄糖的RPMI-1640肉湯按1:10倍稀釋得到1×105CFU/mL~5×105CFU/mL(2倍終濃度)菌懸液。菌懸液應在配制后30 min內完成接種。

9.2 6.2 藥物稀釋液

按3.3配制200倍終濃度的藥物儲存液。使用時按3.4將儲存液1:100倍稀釋。

示例:在9.9 mL 2倍終濃度的含2%葡萄糖的RPMI-1640肉湯中加入100 μL藥物儲存液,經100倍稀釋得到2倍終濃度的工作液,詳見表6。

表6 微量肉湯稀釋法抗真菌藥物稀釋步驟(0.125μg/mL~64μg/mL)

步驟

濃度μg/mL

來源

藥物溶液體積μL

溶劑體積a

μL

中間濃度μg/mL

使用2倍含2%葡萄糖RPMI-1640肉湯1: 100稀釋后終濃度μg/mL

1

12800

儲存液

200

0

12800

128

2

12800

儲存液

100

100

6400

64

3

12800

儲存液

50

150

3200

32

4

12800

儲存液

50

350

1600

16

5

1600

步驟4

100

100

800

8

表6(續)

步驟

濃度

μg/mL

來源

藥物溶液體積

μL

溶劑體積a

μL

中間濃度

μg/mL

使用2倍含2%葡萄糖RPMI-1640

肉湯1: 100稀釋后終濃度

μg/mL

6

1600

步驟4

50

150

400

4

7

1600

步驟4

50

350

200

2

8

200

步驟7

100

100

100

1

9

200

步驟7

50

150

50

0.5

10

200

步驟7

25

175

25

0.25

a參照表1使用適合的溶劑。

9.3 6.3 接種

在96孔微孔板上,第11列作為菌株的陽性生長對照孔,只加肉湯和菌液不加藥物。生長對照孔中先加100μL不含藥的2%葡萄糖RPMI-1640肉湯,之后再加100μL 2倍接種量的菌懸液。第12列為無菌對照孔,只加肉湯,不加菌液和藥物。

從96孔板的第1列至第10列,每孔分別加入100μL來自表6步驟1至10的2倍終濃度藥物稀釋液。第1列為最高濃度(64μg/mL或16μg/mL),第10列為最低濃度(0.12μg/mL或0.03μg/mL)。然后每孔加入100μL 2倍終濃度的菌懸液,最終接種量為5×104 CFU/mL~2.5×105 CFU/mL。

9.4 6.4 培養

將96孔微孔板在35℃±2℃培養24 h±2h。若近平滑念珠菌和季也蒙念珠菌生長不充分,繼續培養12 h~24 h再觀察結果。

9.5 6.5 結果判讀

9.5.1 6.5.1 評分標準

判讀結果時通過與生長對照孔比較觀察生長抑制情況。通過0-4的評分區分孔內生長抑制情況的程度:同5.4.1。

9.5.2 6.5.2 生長終點的判斷標準

兩性霉素B為100%抑制(評分為0,完全清亮),氟胞嘧啶和吡咯類為50%抑制(評分為2,濁度顯著降低)。

9.6 6.6 結果解釋

氟康唑、伏立康唑結果解釋見附錄C。

9.7 6.7 低濃度接種量微量肉湯稀釋法

伊曲康唑、氟胞嘧啶、安尼芬凈、卡泊芬凈、米卡芬凈培養基推薦使用RPMI-1640肉湯,接種過程按照5-1操作,得到1×103CFU/mL~5×103CFU/mL(2倍終濃度菌懸液)。接種過程按6.3操作,但最終接種量為5×102CFU/mL~2.5×103CFU/mL,結果解釋見附錄C。

10 7 質量控制

10.1 7.1 目的

為了保證實驗人員操作和讀取結果的正確性,應對試劑、環境和儀器進行質量控制。

10.2 7.2 質控菌株的保存

10.2.1 7.2.1 保存

保存時應盡可能保持菌株的穩定性,減少突變酵母菌可在沙氏培養基或馬鈴薯葡萄糖培養基生長后進行藥敏試驗。若MIC值在質控范圍內,進行傳代培養后用10%甘油制成菌懸液,滴1~2滴到凍存管中-70℃凍存。若短期內使用也可在沙氏培養基或蛋白胨斜面培養后2℃~8℃保存。

每次使用時,酵母菌在馬鈴薯葡萄糖培養基上35℃培養24 h,新生隱球菌培養48 h后使用,同時再進行傳代過夜培養保存在2℃~8℃備用。

當使用新批次的RPMI-1640肉湯、稀釋管或培養皿時,需用質控菌株進行藥敏試驗,檢測MIC是否在控。

10.2.2 7.2.2 來源

質控菌株可從美國典型菌種收藏庫American Type Culture Collection(ATCC)、英國致病真菌收藏庫National Collection for PathogenicFungi(NCPF)、芬蘭菌種收藏庫Central Bureau for Schimmelcultures(CBS)或參考實驗室以及商業機構獲得。

10.3 7.3 質控的頻率

10.3.1 7.3.1 質控(參考)菌株的MIC范圍

質控(參考)菌株對相應抗真菌藥物的MIC可接受范圍見表7、表8和表9,最佳質控值最好處于可接受范圍的中位數水平。

表7 宏量肉湯稀釋法質控菌株MIC范圍(μg/mL,48 h)

菌株名稱

目的

藥物名稱

MIC范圍

μg/mL

MIC在范圍內的比例

%

近平滑念珠菌

ATCC 22019

質控菌株

兩性霉素B

0.25~1

99.1

氟康唑

2.8~8.0

99.1

伊曲康唑

0.06~0.25

99.0

酮康唑

0.06~0.25

99.0

5氟胞嘧啶

0.12~0.5

98.6

克柔念珠菌

ATCC6258

質控菌株

兩性霉素B

0.25~2.0

99.5

氟康唑

16~64

99.1

伊曲康唑

0.12~0.5

94.0

酮康唑

0.12~0.5

100

5氟胞嘧啶

4.O~16

96.8

表7(續)

菌株名稱

目的

藥物名稱

MIC范圍

μg/mL

MIC在范圍內的比例

%

白念珠菌

ATCC 90028

參考菌株

兩性霉素B

0.0~2.0

91.9

氟康唑

0.25~1.0

97.3

5氟胞嘧啶

0.5~2.0

95.0

白念珠菌

ATCC 24433

參考菌株

兩性霉素B

0.25~1.0

99.5

氟康唑

0.25~1.0

95.9

5氟胞嘧啶

1.0~4.0

91.9

近平滑念珠菌

ATCC 90018

參考菌株

兩性霉素B

0.5~2.0

96.4

氟康唑

0.25~1.0

98.2

5氟胞嘧啶

≤0.12~0.25

99.5

熱帶念珠菌

ATCC 750

參考菌株

兩性霉素B

0.5~2.0

93.7

氟康唑

1.0~4.0

95.5

5氟胞嘧啶

≤0.12~0.25

99.5

表8 微量肉湯稀釋法質控菌株MIC范圍(一)   單位為微克每毫升

抗菌藥物

克柔念珠菌

ATCC 6258

近平滑念珠菌

ATCC 22019

白色念珠菌

F 8555

克柔念珠菌

CL3403

氟康唑

16.0~64.0

0.5~2.0

32.0~128.0

16.0~64.0

伏立康唑

0.03~0.25

0.015~0.06

0.5~2.0

0.12~0.5

表9 微量肉湯稀釋法質控菌株MIC范圍(二)(24 h和48 h)   單位為微克每毫升

菌株名稱

藥物名稱

MIC范圍

24 h

在范圍內比例%

MIC范圍

48 h

在范圍內的比例%

近平滑念珠菌

ATCC 22019

兩性霉素B

0.25~2.0

0.5

97

0.5~4.0

2.0

92

5-氟胞嘧啶

0.06~0.25

0.12

99

0.12~0.5

0.25

98

伊曲康唑

0.12~0.5

0.25

96

0.12~0.5

0.25

98

酮康唑

0.03~0.25

0.06/0.12

98

0.06~0.5

0.12

98

里氟康唑

0.016~0.12

0.06

96

0.03~0.25

0.06

98

泊沙康唑

0.06~0.25

0.12

97

0.06~0.25

0.12

99

米卡芬凈

0.5~2

1

100

0.5~4

1

100

安尼芬凈

0.25~2.0

1.0

95.0

0.5~2.0

1.0

95.0

卡泊芬凈

0.25~1.0

0.5

96.7

0.5~4.0

1.0

92.9

表9(續)   單位為微克每毫升

菌株名稱

藥物名稱

MIC范圍

24 h

在范圍內比例

%

MIC范圍

48 h

在范圍內的比例

%

克柔念珠菌

ATCC 6258

兩性霉素B

0.5~2.0

1.0

100

1.0~4.0

2.0

100

5-氟胞嘧啶

4.0~16

8.0

98

8.0~32

16

99

伊曲康唑

0.12~1.0

0.5

96

0.25~1.0

0.5

100

酮康唑

0.12~1.0

0.5

96

0.25~1.0

0.5

99

里氟康唑

0.06~0.5

0.25

93

0.25~1.0

0.5

100

泊沙康唑

0.06~0.5

0.25

100

0.12~1.0

0.5

99.6

米卡芬凈

0.12~0.5

0.25

99.6

0.12~0.5

0.25

99.0

安尼芬凈

0.03~0.12

0.06

97.9

0.03~0.12

0.06

97.5

卡泊芬凈

0.12~1.0

0.5

98.8

0.25~1.0

0.5

97.5

10.3.2 7.3.2 檢測頻率

7.3.2.1 若所有參考菌株連續檢測30 d,每種藥的30個MIC或MEC值超出參考范圍≤3個,則實驗室可減少為每周質控。對于半衰期短的藥物,檢測周期應更短。

7.3.2.2 當更換試劑或使用新批次藥物儲存液或使用新批次質控菌株時,應重新評價檢測系統(連續檢測30 d)。

7.3.2.3 運行穩定后(30個MIC值超出參考范圍≤3個)應每周進行質控。但當發現MIC值不在控時,應進行每日質控直到找到失控原因并進行糾正。判斷已糾正的標準為連續5d得到的質控結果(5個MIC值)都在控。

7.3.2.4 若無法找到失控原因(5個MIC值超過1個不在控)應進行每日質控。連續檢測30 d運行穩定(30個MIC值超出參考范圍≤3個)后再改為每周質控。

11 附錄A(規范性附錄)RPMI-1640肉湯培養基配方表

RPMI-1640肉湯培養基配方表見表A.1。

表A.1 RPMI-1640肉湯培養基配方表(含谷氨酰胺酚紅,不含碳酸氫鹽)

組分

水g/L

組分

水g/L

組分

水g/L

L-精氨酸

0.200

L-脯氨酸

0.020

核黃素

0.0002

L-天冬酰胺(無水)

0.050

L-絲氨酸

0.030

硫胺素HCl

0.001

L-天冬氨酸

0.020

L-蘇氨酸

0.020

維生素B12

0.000005

L-胱氨酸·2HCl

0.0652

L-色氨酸

0.005

硝酸鈣×H20

0.100

L-谷氨酸

0.020

L-酪氨酸·2Na

0.02883

氯化鉀

0.400

L-谷氨酰胺

0.300

L-纈氨酸

0.020

硫酸鎂(無水)

0.04884

甘氨酸

0.010

生物素

0.0002

氯化鈉

6.000

L-組氨酸(自由基)

0.015

D-泛酸鈣

0.00025

磷酸鈉,二價(無水)

0.800

L-羥脯氨酸

0.020

氯化膽堿

0.003

D-葡萄糖

2.000

L-異亮氨酸

0.050

葉酸

0.001

谷胱甘肽

0.001

L-亮氨酸

0.050

肌醇

0.030

酚紅,Na

0.0053

L-賴氨酸·HCl

0.040

煙酰胺

0.001

維生素B12

0.000005

L-蛋氨酸

0.015

對氨基苯甲酸

0.001

-

-

L-苯丙氨酸

0.015

毗哆醇HCl

0.001

-

-

12 附錄B(規范性附錄)0.5麥氏單位硫酸鋇濁度標準管制備步驟

0.5麥氏單位硫酸鋇濁度標準管制備步驟見表B.1。

表B.10.5麥氏單位硫酸鋇濁度標準管制備步驟

步驟

過程

1

在99.5 mL 0.18 mol/L H2SO4(1%,體積分數)中加入0.5 mL 0.048 mol/L BaCl2

2

使用分光光度計調節濁度,在625 nm波長吸光度應在0.08~0.13之間

3

將4~6 mL液體分裝在螺旋管中

4

室溫密封避光儲存

5

使用前將螺旋管內液體混勻

6

每3個月校準一次濁度

13 附錄C(規范性附錄)酵母樣真菌體外藥敏試驗結果解釋

酵母樣真菌體外藥敏試驗結果解釋見表C.1和表C.2。

表C.1 酵母樣真菌體外敏感試驗結果解釋(一)

折點(S≤或R>)

抗真菌藥物名稱

白念珠菌

熱帶念珠菌

近平滑念珠菌

光滑念珠菌

克柔念珠菌

氟康唑

2/4

2/4

2/4

IEa

b

伏立康唑

0.125/0.125

0.125/0.125

0.125/0.125

IEa

IEa

a治療該菌療效未知。

b克柔念珠菌對氟康唑天然耐藥,不適用此標準。

表C.2 酵母樣真菌體外藥敏試驗結果解釋(二)

抗菌藥物

敏感

(S)

劑量依賴性敏感

( S-DD)

中介

(I)

耐藥

(R)

非敏感

(NS)

伊曲康唑a

≤0.125

0.25~0.5

-

≥1

-

氟胞嘧啶

≤4

-

8~16

≥32

-

安尼芬凈

≤2

-

-

-

>2

卡泊芬凈

≤2

-

-

-

>2

米卡芬凈

≤2

-

-

-

>2

注:以上為酵母樣真菌折點,若檢測的MIC值處在兩個濃度之間時,應報告高濃度。舉例氟胞嘧啶MIC為

12.5μg/mL,則應報告為16μg/mL,判為劑量依賴性敏感(S-DD)。

a 對伊曲康唑,折點適用粘膜感染,對酵母樣真菌引起的深部真菌感染不適用。體外結果的敏感依賴體內應達

到的血藥峰濃度。伊曲康唑血漿濃度應>0.5μg/mL。

14 參考文獻

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