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WS/T 40—1996 尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的高效液相色譜測定方法

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1 拼音

WS/T 40—1996 niào zhōng 2-liú dài sāi zuò wán -4-suō suān de gāo xiào yè xiàng sè pǔ cè dìng fāng fǎ

2 英文參考

Urine-Determination of 2-thiothiazolidine-4-carboxylic acid-High performance liquid chromatographic method

中華人民共和國衛生行業標準 WS/T 40—1996《尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的高效液相色譜測定方法》(Urine-Determination of 2-thiothiazolidine-4-carboxylic acid-High performance liquid chromatographic method)由中華人民共和國衛生部于1996年10月14日發布,自1997年05月01日起實施。

3 1 主題內容與適用范圍

本標準規定了尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的高效液相色譜測定方法。

本法最低檢測濃度為8 μg/L。

本標準適用于接觸二硫化碳人尿中TTCA的測定。

4 2 原理

尿樣經鹽酸酸化后,TTCA被乙醚萃取,經高效液相色譜反相C18分離,紫外檢測器273 nm檢測。保留時間定性,峰高定量。

5 3 儀器

3.1 高效液相色譜儀,紫外檢測器。

3.2 電熱恒溫水浴。

3.3 液體快速混勻器。

3.4 微量注射器,20μL。

3.5 移液管,1 mL,5 mL。

3.6 容量瓶,100 mL。

3.7 具塞試管.10 mL。

3.8 聚乙烯塑料瓶,100 mL。

3.9 尿比重計。

6 4 試劑

本法所用試劑除另有說明外,均為分析純試劑。

4.1 實驗用水,去離子水經全玻璃蒸餾器重蒸餾后,加蓋保存

4.2 鹽酸,ρ20=1.19 g/mL。

4.3 冰乙酸,ρ20=1.05 g/mL。

4.4 甲醇,優級純或經重蒸餾的分析純試劑。

4.5 乙醚,使用新的試劑,否則臨用前須經中性氧化鋁柱除去過氧化物

4.6 鹽酸溶液,2 mol/L。

4.7 TTCA(2-硫代噻唑烷-4-羧酸):制備方法見附錄A。

4.8 TTCA標準溶液:準確稱取40.0mg TTCA(4.7),于100 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度。此溶液1 mL=400μg TTCA。再將其用水稀釋10倍,濃度為1 mL=40μg TTCA。置4℃冰箱可保存兩周。

4.9 質控樣:用加標的模擬尿、接觸者混合尿或加標的正常人混合尿作質控樣。

7 5 采樣、運輸和保存

用聚乙烯塑料瓶采集約50 mL班末尿,盡快測定比重后,于常溫下運輸;但夏季運輸需要冷藏,于-8℃下可保存一周

8 6 分析步驟

8.1 6.1 儀器操作條件

6.1.1 色譜柱:反相C18鍵合硅膠柱。

6.1.2 流動相:甲醇+水+冰乙酸=14.5+84.5+1;   流速:1.5 mL/min。

6.1.3 紫外檢測波長:273 nm。

8.2 6.2 空白試驗

用正常人混合尿樣按6.3條處理、6.5條測定。

8.3 6.3 樣品處理

取1 mL經離心后的尿樣置于具塞試管中,加入0.1 mL鹽酸溶液(4.6)及5 mL乙醚,于液體快速混勻器上振搖2 min。于3000 r/min離心10 min后,將乙醚溶液全量轉移至另一試管中,置40℃水浴上吹氮至于,加入200μL甲醇溶解殘渣

8.4 6.4 標準曲線的繪制

取5支具塞試管,按下表配制標準管。

TTCA標準管的配制

管號

1

2

3

4

5

TTCA標準溶液(4.8),mL

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

水,mL

0.4

0.3

0.2

0.1

0

TTCA含量,μg

4

8

12

16

20

取上述標準管中溶液各20μL,進HPLC測定。以TTCA含量(μg)為橫坐標,色譜峰高為縱坐標,繪制標準曲線。

8.5 6.5 樣品測定

取經6.3條處理的樣品液20μL,進HPLC進行測定。同時測定空白樣(6.2)。其色譜圖見下圖。在測定前后及每測定10個樣品后,測定一次質控樣。

TTCA接觸者尿樣色譜圖

TTCA接觸者尿樣色譜圖

9 7 計算

7.1 按式(1)計算尿樣換算成標準比重(1.020)下濃度的校正系數k。

捕獲.PNG

7.2 按式(2)計算尿中TTCA的濃度。

X = 10×c·k   ………(2)

式中:

X——尿中TTCA濃度,mg/L;

c——從標準曲線查得的TTCA濃度,μg/20μL。

10 8 說明

8.1 本法檢測限0.8 ng,取尿樣1 mL時,最低檢測濃度為8 μg/L。線性范圍:0~8 mg/L。精密度CV=0.52%~3.3%(TTCA含量0~0.8μg.n=12)。準確度:現場樣品加標回收率=78.0%~91.0%(TTCA本底濃度為1.73~2.84 mg/L,加標濃度為2~16 mg/L,n=2)。

8.2 對接觸者應取班末尿分析。取樣前工人須脫離工作場所,洗凈手,以防樣品污染

8.3 影響測定的因素

8.3.1 本法將離心的尿樣經乙醚提取后再次離心,使乙醚層便于分離、轉移,從而保證了分析的準確度。

8.3.2 本法將國外文獻的梯度洗脫條件改為等度洗脫,在色譜儀只有一個泵的情況下亦可使用,便于在國內推廣。亦可采用兩種流動相切換洗脫(A液:甲醇+冰乙酸+水=0.5+95+4.5;B液:甲醇+冰乙酸+水=95+0.5+4.5),洗脫順序:0~3.5 min,A洗脫:3.5~6.5 min,B洗脫;6.5~10 min,A洗脫。切換洗脫可使尿中雜質較快流出,同時亦適于單泵操作。

8.3.3 色譜柱亦可采用徑向加壓柱Radial-PAK C18,分離效果良好。

8.4 質控樣用加標的模擬尿和加標的正常人混合尿時,可考察測定的準確度及精密度。用接觸者混合尿時則只能考察精密度。但人尿樣品不能久存。模擬尿則只含人尿的大量成分。

11 附錄A TTCA標準品的制備(補充件)

L-胱氨酸碳酸鉀存在下與二硫化碳反應24 h。酸化后用稀硝酸三氯甲烷丙酮兩次重結晶得純品。

捕獲.PNG

成方法:碳酸鉀1.12 g(8 m mol)溶解在6 mL水中,加入L-胱氨酸0.96 g(4 m mol)溫熱至全溶。冷卻至室溫后加二硫化碳1.2 mL(16 m mol),室溫(22~25℃),強烈攪拌24 h,用硅膠G薄層控制反應終點,反應完全后用鹽酸酸化至pH=1。反應物以100 mL乙醚分三次提取,合并乙醚提取液以3 mL 10%鹽酸洗滌,分出乙醚層用無水硫酸鎂干燥。干燥后的乙醚提取液在40℃左右回收乙醚,真空下蒸干,得到淡黃色TTCA松散的粉末0.74 g粗品。此粗品用6 mL 1+1稀鹽酸加熱溶解,少許活性碳脫色,趁熱過濾,濾液冷卻析出無色針狀結晶0.5 g(熔點180~181℃)。收率76.6%。

12 附加說明:

本標準由衛生部衛生監督司提出。

本標準由中國預防醫學科學院勞動衛生與職業病研究所負責起草。本標準主要起草人李曉立、沈惠麒。

本標準由衛生部委托技術歸口單位中國預防醫學科學院勞動衛生與職業病研究所負責解釋。

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開放分類:中華人民共和國衛生行業標準職業衛生尿液檢測
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  • 評論總管
    2019/3/24 18:54:22 | #0
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