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IRMA

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IRMA(免疫放射分析)是從放射免疫分析RIA)的基礎上發展起來的核素標記免疫測定,其特點為用核素標記的抗體直接與受檢抗原反應并用固相免疫吸附劑作為B或F的分離手段。免疫放射分析于1968年由Miles和Heles改進為雙位免疫結合,在免疫檢驗中取得了廣泛應用。

1 IRMA的基本原理

免疫放射分析屬固相免疫標記測定,其原理與ELISA極為相似,不同點主要為標記物為核素及最后檢測的為放射性量。單位點免疫放射分析的反應模式如圖16-4。

圖16-4 單位點免疫放射分析原理示意圖

抗原與過量的標記抗體在液相反應后加入免疫吸附劑,即結合在纖維素粉或其他顆粒載體上的抗原。游離的標記抗體與免疫吸附劑結合被離心除去,然后測定上清液的放射性量。

雙位點免疫放射分析的反應模式(圖16-5)與雙抗體夾心ELISA的模式相同,可參見圖15-4。

圖16-5 雙位點免疫放射分析原理示意圖

受檢抗原與固相抗體結合后,洗滌,加核素標記的抗體,反應后洗滌除去游離的標記抗體,測量固相上的放射性量。

不論是單位點還是雙位點免疫放射分析,最后測得的放射性與受檢抗原的量呈正比。

2 免疫放射分析與RIA的異同點

1.標記物在RIA中核素標記抗原,在免疫放射分析中核素標記抗體。抗原有不同種類,根據其化學結構,標記時需用不同的核素和不同的方法。抗體為蛋白質,有利于碘化標記,不同抗體標記方法基本相同。標記抗體的比活度高,提高了分析靈敏度

2.反應速率反應速度與反應物的濃度呈正比,在免疫放射分析中標記抗體是過量的,而且不存在競爭性結合復雜的反應,所以反應速度較RIA快。在RIA中抗體量是微量的,所以一定要用高親和力的多克隆抗體,而在免疫放射分析中應用親和力較低的單克隆體也能得到滿意的結果。

3.反應模式RIA為競爭抑制,測得放射性的量與受檢抗原呈反比。免疫放射分析為非競爭結合,劑量反應曲線為正相關的直線關系。

4.特異性在比位點免疫放射分析中,一般均應用針對不同位點的單克隆抗體,其交叉反應率低于應用多克隆抗體的RIA。

5.標準曲線的工作濃度通常RIA的工作范圍為2~3個數量級,而RIMA可達3個數量級以上。

6.分析誤差RIA中加入的抗體和標記抗原都是定量的,加樣誤差可嚴重影響測定結果。免疫放射分析中標記和固相抗體在反應中都是過量的,只有受檢標本的加樣誤差才會影響分析結果。因此,免疫放射分析的批內和批間變異比較小。

7.其他RIA可以測定大分子量與小分子量的物質,雙位點免疫放射分析只能測定在分子上具有2個以上抗原表位的物質。

在RIA中應用的多為克隆抗體,親和力和特異性要求較高,但用量很少。免疫放射分析中標記抗體和固相抗體用量較多,一般均用來源豐富、特異性較高的單克隆抗體。

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  • 評論總管
    2019/9/16 4:06:06 | #0
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