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GBZ/T 240.21—2011 化學品毒理學評價程序和試驗方法 第21部分:致畸試驗

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1 拼音

GBZ/T 240.21—2011 huà xué pǐn dú lǐ xué píng jià chéng xù hé shì yàn fāng fǎ dì 21bù fēn :zhì jī shì yàn

2 英文參考

Procedures and tests for toxicological evaluations of chemicals—Part 21:Teratogenicity test

ICS 13.100

C 52

中華人民共和國國家職業衛生標準 GBZ/T 240.21—2011《化學品毒理學評價程序和試驗方法 第21部分:致畸試驗》(Procedures and tests for toxicological evaluations of chemicals—Part 21:Teratogenicity test)由中華人民共和國衛生部于2011年08月19日發布,自2012年03月01日起實施。

3 前言

根據《中華人民共和國職業病防治法》制定本部分。GBZ/T 240《化學品毒理學評價程序和試驗方法》現分為以下四十四部分:

——第1部分:總則;

——第2部分:急性經口毒性試驗;

——第3部分:急性經皮毒性試驗;

——第4部分:急性吸入毒性試驗;

——第5部分:急性眼刺激性/腐蝕性試驗;

——第6部分:急性皮膚刺激性/腐蝕性試驗;

——第7部分:皮膚致敏試驗;

——第8部分:鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗

——第9部分:體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗;

——第10部分:體外哺乳動物細胞基因突變試驗;

——第11部分:體內哺乳動物骨髓嗜多染紅細胞微核試驗;

——第12部分:體內哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗;

——第13部分:哺乳動物精原細胞/初級精母細胞染色體畸變試驗;

——第14部分:嚙齒類動物顯性致死試驗

——第15部分:亞急性經口毒性試驗;

——第16部分:亞急性經皮毒性試驗;

——第17部分:亞急性吸入毒性試驗;

——第18部分:亞慢性經口毒性試驗;

——第19部分:亞慢性經皮毒性試驗;

——第20部分:亞慢性吸入毒性試驗;

——第21部分:致畸試驗;

——第22部分:兩代繁殖毒性試驗

——第23部分:遲發性神經毒性試驗;

——第24部分:慢性經口毒性試驗;

——第25部分:慢性經皮毒性試驗;

——第26部分:慢性吸入毒性試驗;

——第27部分:致癌試驗;

——第28部分:慢性毒性/致癌性聯合試驗;

——第29部分:毒物代謝動力學試驗;

——第30部分:皮膚變態反應試驗-局部淋巴結法;

——第31部分:大腸桿菌回復突變試驗;

——第32部分:酵母菌基因突變試驗;

——第33部分:果蠅伴性隱性致死試驗;

——第34部分:枯草桿菌基因重組試驗;

——第35部分:體外哺乳動物細胞程序外DNA合成(UDS)試驗;

——第36部分:體內哺乳動物外周血細胞微核試驗;

——第37部分:體外哺乳動物細胞姊妹染色單體交換;

——第38部分:體內哺乳動物骨髓細胞姊妹染色體交換;

——第39部分:精子畸形試驗;

——第40部分:繁殖/生長發育毒性篩選試驗;

——第41部分:亞急性毒性合并繁殖/發育毒性篩選試驗;

——第42部分:一代繁殖試驗;

——第43部分:神經毒性篩選組合試驗;

——第44部分:免疫毒性試驗。

本部分為GBZ/T 240的第21部分。

本部分由衛生部職業衛生標準專業委員會提出。本部分由中華人民共和國衛生部批準。

本部分起草單位:上海市疾病預防控制中心、中國疾病預防控制中心職業衛生中毒控制所。本部分主要起草人:肖萍、孫金秀、薛春霄、林錚。

化學品毒理學評價程序和試驗方法

第21部分:致畸試驗

4 1 范圍

GBZ/T 240的本部分規定了動物致畸試驗的目的、試驗概述、試驗方法、數據處理與結果評價、評價報告和結果解釋。

本部分適用于檢測化學品的致畸性

5 2 規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GBZ/T 224 職業衛生名詞術語

GBZ/T 240.1 化學品毒理學評價程序和試驗方法 第1部分:總則

6 3 術語和定義

GBZ/T 240.1界定的術語和定義適用于本文件。

3.1

母體毒性 maternal toxicity

引起親代雌性妊娠動物直接或間接的健康損害效應

7 4 試驗目的

檢測妊娠動物接觸化學品后引起胎仔畸形的可能性。

8 5 試驗概述

試驗應設多個劑量組。選擇處于胚胎發育器官形成期的妊娠動物進行染毒,并在胎仔出生前將妊娠動物處死,取出子宮檢查吸收胎、死胎、活胎及胎仔的骨骼內臟畸形的情況。

9 6 試驗方法

9.1 6.1 實驗動物

首選健康、剛進入性成熟期、未經交配的雌性大鼠或家兔,按雌雄動物比例2:1或1:1交配。試驗前的適應期至少為3d。

為了獲得足夠的胎仔數,正確地評價受試樣品致畸的可能性,對于大鼠,每個劑量組和對照組至少應有15只妊娠動物,家兔至少為12只。

9.2 6.2 劑量設計

試驗至少設3個劑量組、1個陰性對照組,必要時可設1個陽性對照組。陽性對照物可選用環磷酰胺阿司匹林維生素A。對照組動物除了不給予受試樣品外,其他處理應與劑量組完全相同。試驗可以先采用預試驗,了解受試樣品引起胚胎或胎仔死亡的劑量。在受試樣品理化和生物特性允許的條件下,高劑量組劑量應使母體出現明顯的毒性反應,如輕微的體重下降,但不能引起超過10%的母體死亡;低劑量應不引起動物任何可觀察到的毒性反應;在低劑量和高劑量之間可按幾何級數設置中間劑量。如果受試樣品的毒性較低,1000 mg/kg體重的劑量對胚胎無明顯毒性或致畸作用,則可以采用限量試驗,即試驗不需要設其他劑量組。若高劑量的預試驗對母體確有一定的毒性作用,但對胚胎無不良影響,也可以采用限量試驗。

9.3 6.3 試驗步驟

9.3.1 6.3.1 染毒途徑

通常為經口灌胃,也可以采用其他與人的接觸方式相同的給樣方式。每天的染毒應在同一時間進行。如果受試樣品是通過灌胃染毒的,應按每只母體動物的體重來確定每日的染毒量。

9.3.2 6.3.2 交配及染毒期限

雄性和雌性動物按1:1或1:2的比例合籠交配。每天早晨應對雌性動物進行檢查,查看陰道中是否有精子或陰栓。將檢查到精子或陰栓的當天計為雌性動物妊娠的第0天。將妊娠動物隨機分組后,于胚胎器官的形成期開始染毒(大鼠為孕后6 d~15 d,家兔為孕后6 d~18 d),每天一次。

9.3.3 6.3.3 觀察期限及指標

6.3.3.1 每日至少對妊娠動物進行一次仔細的臨床觀察。發現虛弱或瀕死的動物,應進行隔離或人道處死,對死亡的動物應進行尸檢。如母體有流產早產癥狀者也應處死并作大體檢查。

6.3.3.2 每日稱取妊娠動物體重,每周記錄攝食量,并觀察其臨床癥狀,包括皮膚、毛、眼睛、黏膜、呼吸系統循環系統神經系統四肢活動行為方式的改變。

6.3.3.3 及時記錄任何毒性反應,包括出現的時間、程度和持續的時間。

9.3.4 6.3.4 觀察指標

分娩前一天處死妊娠動物(大鼠為妊娠第20天,小鼠為妊娠第18天,家兔為妊娠后第29天),立即進行解剖檢查。

9.3.4.1 6.3.4.1 子宮觀察

取出子宮,分別稱取子宮、胎盤和活胎的重量,記著床數、活胎數、死胎數及吸收胎數。

9.3.4.2 6.3.4.2 外觀檢查

逐一記錄活胎仔的身長和尾長。檢查外觀有無異常,如頭部:無腦腦膨出、露腦、頭蓋裂、腦積水、小頭、顏面裂、小眼、無眼眼球突出、無耳、小耳、耳位低、無顎、小顎下顎、兔唇和下頜裂;軀干部:胸骨裂、胸部裂、脊椎裂、脊椎側彎、脊椎前彎、脊椎后彎、臍疝尿道下裂、無肛門、短尾、卷尾、無尾腹裂;四肢:多肢、無肢、短肢、半肢、多趾、無趾、并趾、短趾和缺趾。胎鼠畸形檢查方法見附錄A。

9.3.4.3 6.3.4.3 骨骼檢查

將每窩1/2的胎仔放入茜素紅液(配制方法見附錄B的B.1)中染色,進行骨骼檢查。測量囟門大小,矢狀縫的寬度,頭頂間骨及后頭骨缺損情況,然后檢查脊柱骨的數目、融合、縱裂、部分裂開、骨化中心數、發育不全、縮窄、脫離形狀骨盆的弓數目、骨化中心數、形狀異常、融合、裂開、縮窄和脫離;四肢骨的形狀和數目;腕骨的骨化中心數;掌骨、趾骨的形狀;肋骨的數目、形狀、融合、分叉、缺損和發育不全;胸骨的形狀、完全缺失、胸骨節融合、裂開、形狀異常和發育不良等情況。

9.3.4.4 6.3.4.4 內臟檢查

將每窩另一半的胎仔放人Bouin's液(配制方法見附錄B的B.2)中,固定兩周后作臟器和軟組織檢查。檢查有無異常,如頭部:嗅球發育不良、側腦室擴張、第三腦室擴張、角膜缺損等;胸部:右心位、房中隔缺損、室間隔缺損主動脈弓食道閉鎖、氣管狹窄、無肺、多肺、肺葉融合、膈疝氣管食管瘺和內臟異位等;腹部:肝分葉異常、腎上腺缺失、多囊腎膀胱缺失、睪丸缺失、陰睪、卵巢缺失、卵巢異位、子宮缺失、子宮發育不全、腎積水、腎缺失和輸尿管積水等。對于家兔每個胎仔都應解剖進行臟器檢查和骨骼檢查。

10 7 數據處理與結果評價

10.1 7.1 數據處理

數據可以用統一的表格進行統計,表中應顯示每組的實驗動物數、平均體重、受孕動物數、黃體數、著床數、吸收胎數、活胎數、死胎數及其百分率、胎仔的情況(體重、胎盤重、體長、尾長)、畸胎的類型(包括外觀、骨骼和內臟)、數目及百分率。

數據可采用任何一種適當的統計方法進行處理。應將各劑量組的指標相應地與對照組進行顯著性檢驗。其中,以畸胎率最為重要,主要有以下兩種:

公式

注:凡每一活胎出現一種以上畸形時,均作一個畸胎計。

當出現的畸胎是以某一種或某幾種畸形為主時,就應按畸形種類單獨計算該畸形率。

公式

致畸指數=雌性動物LD50/最小致畸劑量

10.2 7.2 結果評價

7.2.1 評價時應結合所用動物品系的歷史性的資料進行,包括自發畸變種類和頻率

7.2.2 如果某劑量組的總畸胎率或某單項畸胎率與對照組相比明顯增高,且差異有顯著性,可表明該劑量有致畸作用。

7.2.3 試驗結果應能得出受試樣品是否有母體或胚胎毒性、致畸性,最好能得出無致畸劑量和最小致畸劑量。

11 8 評價報告

除GBZ/T 240.1規定的一般項目外,評價報告還應包括以下內容:

a) 給予受試樣品的方法和期限;

b) 孕鼠體重增長和妊娠情況;

c) 受孕動物數、黃體數、著床數、吸收胎數、活胎數、死胎數及其百分率;

d) 胎仔的情況(體重、胎盤重、體長、尾長)、畸胎的類型(包括外觀、骨骼和內臟)、數目及百分率。

12 9 結果解釋

解釋致畸試驗結果時,應注意種屬的差異。試驗結果從動物外推到人存在著一定的局限性。

13 附錄A(資料性附錄)胎鼠畸形檢查方法

13.1 A.1 胎鼠外觀檢查

對每只胎鼠先經肉眼檢查,如果肉眼不能確定某種畸形時,將胎鼠放在解剖顯微鏡下迸一步確定并照相,胎鼠的檢查順序如下。

13.2 A.2 胎鼠的頭部檢查

有無露腦(無頭蓋骨),腦膜膨出,頭部大小(大頭可能腦積水、小頭為頭部發育不良)。眼睛的有無,眼所在部位,大小(小眼或大眼),突眼或開眼等。兩耳、鼻和嘴外表是否正常和對稱,上下頜有無唇裂

13.3 A.3 四肢的檢查

四肢有無多趾(指)、并趾、少趾、無趾、足內外翻、短肢等畸形。

13.4 A.4 軀干的檢查

有無臍疝、腹裂(內臟膨出),脊髓膨出、脊柱裂脊柱側突等。

13.5 A.5 尾部檢查

有無短尾、卷尾、無尾和尾分叉等。

13.6 A.6 標本的制作

將每窩1/2胎鼠放人Bouin's液固定,作為內臟檢查,另1/2放入95%酒精中固定作為骨骼檢查。

13.7 A.7 骨骼標本的制備

胎鼠放入1% KOH溶液中軟化至能很清楚地看見骨骼為止,必要時中間可更換1次KOH溶液。

13.8 A.8 骨骼染色

將骨骼標本放入茜素紅應用液中染色16 h,直至全部骨骼染成紫紅色為止,中間可更換一次染液。

13.9 A.9 骨骼透明

染好色以后,用自來水沖凈標本,倒掉染液,將標本置于50%甘油脫色3 d~5 d。

13.10 A.10 骨骼檢查

A.10.1 頭骨檢查:顱骨是否完整,有無骨化不全,骨縫的寬窄,枕骨的形狀。

胎鼠上枕骨骨化程度的分級標準如下:

——0級:上枕骨成片狀或啞鈴狀,兩側骨化點完全融合,融合處寬度大于兩側的1/3。

——Ⅰ級:上枕骨兩側骨化點相連,相連處寬度小于兩側的1/3。

——Ⅱ級:上枕骨兩側骨化點不相連,但可清楚地見到兩個較大的骨化點。

——Ⅲ級:上枕骨兩側的骨化點不相連,僅見小骨化點或僅見一側骨化點。

——Ⅳ級:無上枕骨骨化點。

A.10.2 胸部骨骼:正常胸骨為6塊,畸形時可有骨骼錯位及骨化不全,注意觀察第2胸骨和第5胸骨。小鼠正常肋骨為13對,觀察有無多肋、少肋、肋骨分叉、融合、波狀肋等畸形。

A.10.3 四肢骨:檢查骨化程度、長短粗細、指趾骨的發育狀況。

13.11 A.11 胎鼠內臟徒手切片檢查

將胎鼠從Bouin's液中取出,自來水沖凈。測量每只胎鼠身長及尾長。

13.12 A.12 頭部切片

將胎鼠放在蠟板或木板上,第1刀由嘴開始經兩耳切開,暴露舌、腭、上唇和下頜,檢查舌有無異常,有無腭、唇裂。將頭翻過來前背向上,切剩下的切片。第2刀從眼睛前面切下,暴露鼻中隔鼻竇,記錄鼻腔是否通。第3刀平眼切下,暴露腦鼻葉,鼻中隔后區的大部分及鼻咽腔、眼組織、視網膜玻璃體、晶狀體和角膜,檢查這些組織結構有無異常。第4刀從眼后切開,暴露大腦半球和側腦室,并注意有無畸形和擴張。第5刀橫切大腦半球,暴露間腦的第Ⅲ腦室、側腦室、脈絡膜等檢查這些部位有無異常。

13.13 A.13 內臟切片檢查

沿胸腹壁中線和肋下沿水平線各切一刀,暴露胸腔與腹腔內臟,檢查各臟器有無異常。

13.14 A.14 統計

應用適當的統計學軟件對數據進行分析處理。各組母鼠平均體重,胎鼠體重、身長、尾長,計量資料以均數±標準差捕獲.PNG±s)表示,數據采用F檢驗進行顯著性分析。活胎、死胎、畸形、吸收胎等計數資料用百分率表示,數據采用x2檢驗進行顯著性分析。

——活胎率=活胎數/胎鼠數×100%;

——死胎率=死胎數/胎鼠數×100%;

——吸收胎率=吸收胎數/著床數×100%;

——畸形率=畸形仔鼠數/受檢胎鼠數×100%;

——孕鼠體重凈增長=解剖前體重-受孕第6天體重-含胎子宮重。

14 附錄B(資料性附錄)茜素紅液和Bouin's液配制方法

14.1 B.1 茜素紅液配制方法

冰醋酸   5 mL

純甘油   10 mL

1%水合氯醛   60 mL

臨用時用1% KOH稀釋成0.1%的應用液。

14.2 B.2 Bouin's液配制方法

苦味酸飽和液   75 mL

甲醛   25 mL

冰醋酸   5 mL

混合使用。

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開放分類:中華人民共和國國家職業衛生標準化學品毒理學評價程序和試驗方法毒理學致畸
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  • 評論總管
    2021/1/21 10:17:47 | #0
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