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GB/T 33420—2016 壓力蒸汽滅菌生物指示物檢驗方法

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1 拼音

GB/T 33420—2016 yā lì zhēng qì miè jūn shēng wù zhǐ shì wù jiǎn yàn fāng fǎ

2 英文參考

Evaluation standard of biological for moist heat sterilization processes

3 基本信息

ICS 11.080

C 50

中華人民共和國國家標準 GB/T 33420—2016《壓力蒸汽滅菌生物指示物檢驗方法》(Evaluation standard of biological for moist heat sterilization processes)由中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局、中國國家標準化管理委員會于2016年12月30日發布,自2017年07月01日起實施。

4 前言

本標準按照GB/T 1.1—2009給出的規則起草。

本標準由中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會提出并歸口。

本標準起草單位:中國疾病預防控制中心環境與健康相關產品安全所、中國人民解放軍疾病預防控制所、山東新華醫療器械股份有限公司、中國醫學科學院協和醫院、山東利爾康消毒科技股份有限公司、3M中國有限公司、杭州魯沃夫貨物進出口有限公司。

本標準主要起草人:張流波、張劍、姚楚水、張青、王妍彥、沈瑾、黃靖雄、朱曉明、朱漢泉、史紹毅、馬玲、班海群。

5 標準正文

壓力蒸汽滅菌生物指示物檢驗方法

5.1 1 范圍

本標準規定了壓力蒸汽滅菌生物指示物的檢驗方法。

本標準適用于壓力蒸汽滅菌生物指示物的檢驗。

5.2 2 規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB 18281.1 醫療保健產品滅菌 生物指示物 第1部分:通則

GB/T 24628 醫療保健產品滅菌 生物與化學指示物 測試設備

消毒技術規范(2002年版)衛生部

5.3 3 術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

生物指示物 biological indicator;BI

對指定條件下的特定滅菌程序具有一定抗力,并裝在內層包裝中可供使用的染菌載體

3.2

載體  carrier

試驗微生物的支持物。

3.3

存活時間  survival time;ST

在規定的條件下暴露于殺菌因子,試驗的生物指示物中微生物存活的最長時間。

3.4

殺滅時間  killing time;KT

測定生物指示物抗力時,受試樣本經殺菌因子作用后,全部無菌生長的最短作用時間。

3.5

D值  D value

設定的暴露條件下,殺滅特定試驗微生物總數的90%所需的時間。

3.6

存活曲線  survlvor curve

在固定的滅菌因子作用下,微生物的存活情況與暴露變化的關聯曲線。

3.7

生物指示物抗力測試儀  biological indicator evaluator resistometer

產生限定條件下滅菌過程中物理化學變化規定組合,以測量抗力的專用設備。

5.4 4 檢驗指標與方法

5.4.1 4.1 抗力

5.4.1.1 4.1.1 菌種

用于制作壓力蒸汽滅菌生物指示物的菌株為嗜熱脂肪桿菌芽孢(Geobacillusstearothermophilus

ATCC7953或SSI K31)或被證明具有本標準所要求的同等性能的微生物。

5.4.1.2 4.1.2 菌量

回收菌量大于等于1×105CFU/片或大于等于1×105CFU/支,對于成品的指示物,載體回收的菌量與說明書上的菌量誤差在一50%~+300%之間,懸液回收的菌量與說明書上的菌量誤差在±35%。測定菌量時,應最少測試4個樣本,具體檢測方法參見附錄A。

5.4.1.3 4.1.3 D值

測試抗力時應使用生物指示物抗力測試儀,生物指示物抗力測試儀要求見GB/T 24628。在121℃時,D值的要求:D值大于或等于1.5 min,對于成品的指示物,測試的D值應在說明書上的D值±20%的范圍內。應至少使用下列2種方法進行測試:

a)存活曲線法測試D值,參見附錄B;

b)部分陰性法測試D值,參見附錄C;

c)驗證法測試D值,將a)或者b)測試出的D值和4.1.2的回收菌量的平均數帶入式(1)和式(2),計算出ST值和KT值。參照附錄D進行驗證:

ST≥(logN0-2)×D值    ………(1)

KT≤(logN0+4)×D值    ………(2)

式中:

N0——每批生物指示物的回收菌量的平均數。

5.4.1.4 4.1.4 存活時間與殺滅時間

在121℃時,ST值的要求:大于或等于4.5 min;KT值的要求:小于或等于24 min。

5.4.2 4.2 載體的要求

符合GB 18281.1的要求。

5.4.3 4.3 恢復培養基的要求

5.4.3.1 4.3.1 恢復培養基應滿足下列要求:

a)  使10 CFU~100 CFU的微生物恢復生長;

b) 使損傷的微生物恢復生長;

c)  經過壓力蒸汽滅菌后不會產生抑制微生物生長的物質。

5.4.3.2 4.3.2 恢復培養基按以下方法檢驗:

每個樣本的恢復培養基中,接種10 CFU~100 CFU的嗜熱脂肪桿菌芽孢(ATCC7953),同時設置陰性對照和陽性對照,培養至規定時間后觀察有無嗜熱脂肪桿菌芽孢生長(一般觀察培養基的顏色變化)。如果恢復培養基有菌生長,并且陰性對照無菌生長和陽性對照有菌生長,判斷恢復培養液合格。

5.4.4 4.4  穩定性試驗

取包裝完好的同批次生物指示物放置于制造商建議的保存條件下,存放至標簽和說明書規定的有效期限,取出再次進行評價,生物指示物應符合4.1、4.2和4.3的要求。

6 附錄

6.1 附錄A(資料性附錄)活菌培養計數方法

A.1  取含有10 mL TPS(0.1%胰蛋白胨的生理鹽水溶液)的無菌試管,加入適量無菌玻璃珠,將計數菌片投入試管,用電動混合器混合,到菌片被完全打碎,制成菌懸液。

A.2 將試管按需要數量分組排列于試管架上,每管加入4.5 mL TPS。各組由左向右,逐管標上10-1、10-2、10-3……等。

A.3 將菌懸液用電動混勻器混合20 s,或在手掌上用力振打80次,隨即吸取0.5 mL加至10-1管內。

A.4 將10-1管依前法用電動混勻器混合20 s,或在手掌上用力振打80次,混勻,再吸取出0.5 mL加入10-2管內。如此類推,直至最后一管。必要時,還可作某稀釋度的1:1或1:4稀釋。

A.5 選擇適宜稀釋度試管(以預計生長菌落數每平板為15 CFU~300 CFU者為宜),吸取其中混合均勻的懸液1.0 mL加于無菌平皿內。每一稀釋度接種2個平皿。一般需接種2個~3個不同稀釋度。

A.6 將40℃~45℃熔化的嗜熱脂肪桿菌芽孢恢復培養基參見《消毒技術規范(2002年版)》,傾注于已加入樣液的平皿中,每平皿15 mL~20 mI_。

A.7 將平皿蓋好,即刻輕輕搖動混勻,平放。待瓊脂凝固后,翻轉平皿使底向上,置56℃±2℃恒溫培養箱內培養。

A.8 培養至72 h,計數菌落數。一般以肉眼觀察,必要時用放大鏡檢查。以每平板菌落數在30 CFU~300 CFU的稀釋度為準記錄結果。

A.9 根據稀釋倍數和接種量計算每毫升菌液巾或每一菌片(染菌載體)上的平均菌落數。 A.10 菌液計數從A.3步驟開始操作。

6.2 附錄B(資料性附錄)存活曲線法測試D值

B.1 隨機抽取50個樣本。

B.2 根據不同的暴露溫度設置10個暴露時間點,每個時間點測試5個樣本,最短的暴露時間可以設定為0 s,最長的暴露時間使菌量減少到小于或等于初始菌量的0.01%。

B.3 測試之前,首先對生物指示物抗力測試儀進行預熱。

B.4 按照生物指示物抗力測試儀操作說明書的流程進行操作,分別對10個暴露時間分別處理。

B.5 處理完畢,參照附錄A對各組樣本隨機抽取3個進行活菌計數

B.6 用所得的全部存活菌數的常用對數值,對時間(min)作圖,用最小二乘法進行回歸分析,確定最佳線性曲線。回歸分析時不應包括原先菌落數0.510g范圍內的存活數據點。計算所得直線斜率的負倒數值,即等于以分鐘表示的指定暴露條件下的D值,同時所得線性曲線相關系數應不小于0.8。

6.3 附錄C(資料性附錄)部分陰性法計算D值

C.1  隨機選取120個樣本。分成6組,每組20個樣本。

C.2 生物指示物抗力測試儀參數設置:

a)  暴露溫度設置121℃;

b) 暴露時間至少為6個時間點,至少1個時間點全部有菌生長,至少2個時間點部分有菌生長,至少2個時間點全部無菌生長。

C.3 對6組樣本分別暴露。

C.4 暴露完成后將6組生物指示物在56℃±2℃溫度下,按照說明書要求培養到規定時間,記錄陰性和陽性結果。當最短暴露時間點全部為陽性,最長暴露時間全部為陰性,并且中間至少2組有部分樣本陽性,試驗結果有效,帶入式(C.1)和式(C.2)計算D值。

C.5  Limited Spearman-Karber法(LSKP),達到無菌生長平均時間的計算見式(C.1):

捕獲.PNG

D值的計算見式(C.2):

捕獲.PNG

式中:

UHSK——達到無菌生長平均時間,單位為秒(s);

UK——首次顯示所有樣本無菌生長的暴露時間,單位為秒(s);

d——暴露時間的固定間隔,單位為秒(s);

n——每組的樣本量,單位為個;

ri——每次暴露無菌樣本數量,單位為個;

N0——回收菌落數,單位為CFU;

0.2507——計算系數。

6.4 附錄D(資料性附錄)驗證法測試D值

6.4.1 D.1 ST值驗證

將50個試驗樣本放入壓力蒸汽滅菌生物指示物抗力測試儀中,作用濃度為2.3 mg/L±0.4 mg/L,在50℃±0.5℃時,暴露時間設定為計算出的ST值,暴露完成后,將50個生物指示物樣本取出,置于56℃±2℃培養至說明書規定時間。若全部有菌生長,則計算的ST值通過驗證;若有樣本無菌生長,則計算的ST值沒有通過驗證。

6.4.2 D.2 KT值驗證

將50個試驗樣本放入壓力蒸汽滅菌生物指示物抗力測試儀中,作用濃度為2.3 mg/L±0.4 mg/L,在50℃±0.5℃時,暴露時間設定為計算出的KT值,暴露完成后,將50個生物指示物樣本取出,置于56℃±2℃培養至說明書規定時間。若全部無菌生長,則計算的KT值通過驗證;若有樣本有菌生長,則計算的KT值沒有通過驗證。

6.4.3 D.3 判定

計算的ST值和KT值都通過驗證,則判定測出的D值有效。

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  • 評論總管
    2018/10/22 17:41:51 | #0
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本頁最后修訂于 2017年11月29日 星期三 23:40:46 (GMT+08:00)
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