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DNA克隆化

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1 注解

將特定的DNA片斷結合于自我增殖的載體上,再納入寄主細胞使DNA片斷增殖,這一過程稱為DNA克隆化。如果以特定的基因為對象時,則稱為基因純系化(基因克隆化gene cloning)。大腸菌K12株及其質粒噬菌體的EK系是其代表性的系統。在從各種生物所具有的巨大數目的基因中選出特定的基因DNA,一般多用下述方法

把從某種生物中提取的全部DNA,通過限制性內切酶等使之成為片斷,對此片斷不分級而直接進行克隆化的實驗稱為霰彈槍式實驗。即此時先將各DNA片斷無差別地進行克隆化,然后將所要求的片斷選取出來,除根據其基因表現型進行選擇和測定外,還可使用集落雜交法(或噬菌斑雜交法)。與此相反,作為目標的基因從特異出現的組織中將信使RNA(m-RNR)分提,通過反轉錄酶合成與mRNA互補的DNA(cDNA),將此DNA與載體結合而進行克隆化,這是最常用的方法。在這種情況下,可直接獲得所需要遺傳信息的DNA克隆,但在cDNA由于基因內區部分缺失,而與原來基因在結構上不同。不過cDNA的這種性質,根據實驗目的多具有利之點,同時可利用被克隆化的cDNA從基因組DNA中找出原來的基因而再進行克隆化也是可能的。此外,對巳知氨基酸序列的蛋白質,認為在遺傳密碼表中有其相反對應的DNA堿基序列,據此也可被用于人工合成的DNA純系化的方法中。

相關文獻

開放分類:生物學DNA
詞條DNA克隆化
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參與討論
  • 評論總管
    2020/11/28 7:07:15 | #0
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