薄層色譜法

這是一個關于薄層色譜法的開放分類，共收錄詞條2個（含子類）。

概述

薄層色譜法亦稱薄層層析法。是將吸附劑或載體均勻地鋪在玻璃板、塑料板或鋁基片上形成一均勻薄層，待點樣、展開后，與適宜的對照物按同法在同板上所得的色譜圖對比，并可用薄層掃描儀進行掃描，用以進行藥品的鑒別，雜質檢查或含量測定的方法。按分離機制可分為吸附、分配、離子交換、凝膠過濾等法。適用于微量樣品的分離鑒定，具有分離速度快，分離效率高的特點。

薄層色譜法的定義

薄層色譜法系將供試品溶液點樣于薄層板上，經展開、檢視后所得的色譜圖，與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比，用于藥品的鑒別或雜質檢查的方法。

薄層色譜法的儀器與材料

薄層板

自制薄層板 除另有規定外，玻璃板要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。最常用的固定相有硅膠G、硅膠GF₂₅₄、硅膠H和硅膠HF₂₅₄，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F254等。其顆粒大小，一般要求粒徑為5～40μm。

薄層涂布，一般可分為無黏合劑和含黏合劑兩種。前者系將固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的黏合劑，一般常用10%～15%煅石膏（CaSO₄·2H₂O在140℃加熱4小時），混勻后加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液（0.2%～0.5%）適量調成糊狀，均勻涂布于玻璃板上。使用涂布器涂布應能使固定相在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

市售薄層板 分普通薄層板和高效薄層板，如硅膠薄層板、硅膠GF₂₅₄薄層板、聚酰胺薄膜和鋁基片薄層板等。高效薄層板的粒徑一般為5～7μm。

點樣器

常用具支架的微量注射器或定量毛細管，應能使點樣位置正確、集中。

展開容器

應使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸，并有嚴密的蓋子，底部應平整光滑，或有雙槽。

顯色劑

見各品種項下的規定。可采用噴霧顯色、浸漬顯色或置適宜試劑的蒸氣中熏蒸顯色，用以檢出斑點。

顯色裝置

噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻

細霧狀噴出；浸漬顯色可用專用玻璃器皿或用適宜的玻璃缸代替；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽玻璃缸或適宜大小的干燥器代替。

檢視裝置

檢視裝置為裝有可見光、短波紫外光（254nm）、長波紫外光（365nm）光源及相應濾片的暗箱，可附加攝像設備供拍攝色譜用，暗箱內光源應有足夠的光照度。

薄層色譜法的操作方法

薄層板制備

自制薄層板 除另有規定外，將1份固定相和3份水在研缽中按同一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平穩地移動涂布器進行涂布（厚度為0.2～0.3mm），取下涂好薄層的玻璃板，置水平臺上于室溫下晾干后，在110℃活化30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。

市售薄層板 臨用前一般應在110℃活化30分鐘。聚酰胺薄膜不需活化。鋁基片薄層板可根據需要剪裁，但須注意剪裁后的薄層板底邊的硅膠層不得有破損。如在貯放期間被空氣中雜質污染，使用前可用適宜的溶劑在展開容器中上行展開預洗，110℃活化后，置干燥器中備用。

點樣

除另有規定外，用點樣器點樣于薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊2.0cm，樣點直徑為2～4mm（高效薄層板為1～2mm），點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜，一般為1.0～2.0cm（高效薄層板可不小于5mm）。點樣時必須注意勿損傷薄層板表面。

展開

展開缸如需預先用展開劑飽和，可在缸中加入足夠量的展開劑，必要時在壁上貼兩條與缸一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封頂蓋，使系統平衡或按各品種項下的規定操作。

將點好供試品的薄層板放入展開缸中，浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5～1.0cm（切勿將樣點浸入展開劑中），密封頂蓋，待展開至適宜的展距（如：20cm的薄層板，展距一般為10～15cm；10cm的高效薄層板，展距一般為5cm左右），取出薄層板，晾干，按各品種項下的規定檢測。

展開可以單向展開，即向一個方向進行；也可以進行雙向展開，即先向一個方向展開，取出，待展開劑完全揮發后，將薄層板轉動90°，再用原展開劑或另一種展開劑進行展開；亦可多次展開。

顯色與檢視

熒光薄層板可用熒光猝滅法；普通薄層板，有色物質可直接檢視，無色物質可用物理或化學方法檢視。物理方法是檢出斑點的熒光顏色及強度；化學方法一般用化學試劑顯色后，立即覆蓋同樣大小的玻璃板，檢視。

系統適用性試驗

按各品種項下要求對檢測方法進行薄層色譜法系統適用性試驗，使斑點的檢測靈敏度、比移值（R_f）和分離效能符合規定。

檢測靈敏度

系指雜質檢查時，供試品溶液中被測物質能被檢出的最低量。一般采用對照溶液稀釋若干倍的溶液與供試品溶液和對照溶液在規定的色譜條件下，在同一塊薄層板上點樣、展開、檢視，前者應顯示清晰的斑點。

比移值（Rf）

系指從基線至展開斑點中心的距離與從基線至展開劑前沿的距離的比值。鑒別時，可用供試品溶液主斑點與對照品溶液主斑點的比移值進行比較，或用比移值來說明主斑點或雜質斑點的位置。

除另有規定外，比移值（R_f）應在0.2～0.8之間。

分離效能

鑒別時，在對照品與結構相似藥物的對照品制成混合對照溶液的色譜圖中，應顯示兩個清晰分離的斑點。雜質檢查的方法選擇時，可將雜質對照品用供試品自身稀釋對照溶液溶解制成混合對照溶液，也可將雜質對照品用待測組分的對照品溶液溶解制成混合對照溶液，還可采用供試品以適當的降解方法獲得的溶液，上述溶液點樣展開后的色譜圖中，應顯示兩個清晰分離的斑點。

測定法

鑒別

薄層色譜法用于鑒別時，可采用與同濃度的對照品溶液，在同一塊薄層板上點樣、展開與檢視，供試品溶液所顯主斑點的顏色（或熒光）與位置（R_f）應與對照品溶液的主斑點一致，而且主斑點的大小與顏色的深淺也應大致相同。或采用供試品溶液與對照品溶液等體積混合，應顯示單一、緊密的斑點；或選用與供試品化學結構相似的藥物對照品與供試品溶液的主斑點比較，兩者R_f應不同，或將上述兩種溶液等體積混合，應顯示兩個清晰分離的斑點。

雜質檢查

薄層色譜法用于雜質檢查時，可采用雜質對照品法、供試品溶液的自身稀釋對照法，或兩法并用。供試品溶液除主斑點外的其他斑點應與相應的雜質對照品溶液或系列濃度雜質對照品溶液的相應主斑點比較，或與供試品溶液的自身稀釋對照溶液或系列濃度自身稀釋對照溶液的相應主斑點比較，不得更深。

通常應規定雜質的斑點數和單一雜質量，當采用系列自身稀釋對照溶液時，也可規定估計的雜質總量。

薄層掃描法

系指用一定波長的光照射在薄層板上，對薄層色譜有吸收紫外光或可見光的斑點，或經激發后能發射出熒光的斑點進行掃描，將掃描得到的圖譜及積分數據用于藥品的鑒別，雜質檢查或含量測定。

除另有規定外，薄層掃描方法可根據各種薄層掃描儀的結構特點及使用說明，結合具體情況，選擇反射方式，采用吸收法，或熒光法，用雙波長或單波長掃描。測定方法有內標法及外標法，由于影響薄層掃描結果的因素很多，故薄層掃描定量測定應在保證供試品斑點的量在校正曲線的線性范圍內的情況下，與對照品同板點樣，展開，掃描，測量和計算。

用外標法測定時，若對照品各數據點在校正曲線上呈一通過原點的直線時，可用一點法校正，如不通過原點通常宜采用二點法校正，必要時用多點法校正。含量測定時，供試品溶液和對照品溶液應交叉點于同一薄層板上，供試品點樣不得少于4個,對照品每一濃度不得少于2個，薄層掃描定量用的對照品純度應符合含量測定用對照品的要求。

分類關系樹