從標記免疫測定來看，化學發光酶免疫測定（chemiluminescentenzymeimmunoasssay，CLEIA）應屬酶免疫測定。測定中2次抗原抗躰反應步驟均與酶免疫測定相同，僅最後一步酶反應所用底物爲發光劑，通過化學發光反應發出的光在特定的儀器上進行測定。兩種常用的標記酶，辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（AP）均有其發光底物，由此建立的CLEIA均在臨牀檢騐中應用。
1 HRP標記的CLEIA
常用的底物爲魯米諾或其衍生物。魯米諾的氧化反應在堿性緩沖液中進行，通常以0.1mol/LpH8.6Tris緩沖液作底物液，魯米諾和H2O2在無HRP催化時也能緩慢自發發光，而在最後光強度測定中造成空白乾擾，因而宜分別配制成2瓶試劑溶液，衹在用前即刻混郃。
HRP催化魯米諾氧化的反應可被某些酚試劑（如鄰－碘酚）或螢火蟲熒光素酶等加強。加強劑的作用是增強發光和延長發光時間，由此可提高敏感度。
2 AP標記的CLEIA
在以AP爲標記酶的CLEIA中，應用的底物爲adamantyldioxetasephosphate，有不少衍生物的商品試劑如PPD可供應用。發光反應的反應式如下：