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5-羥色胺

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1 拼音

5-qiǎng sè àn

2 英文參考

5-HT

5 - hydroxytryptamine

3 概述

5-HT又稱血清素(serotonin),由色氨酸衍生,色氨酸經色氨酸羥化酶作用形成5-羥色氨酸,再經脫羧酶成為5-HT。5-HT是中樞神經系統傳遞物質,其活性部分是吲哚胺。它廣泛存在于腦、血小板、胃等組織中,以腦中的含量最大,是較強的平滑肌刺激血管收縮劑。它在血小板中含量較高,血小板破裂釋放后參與血管收縮等效益。2/3的5-HT在肝臟硫酸葡萄糖醛酸結合后排出,或將吲哚斷裂而分解;約1/3經單氨氧化酶作用氧化脫氨形成5-HLAA后從尿排出。5-HIAA是5-羥色氨酸代謝的最終產物,不具有生物活性。

4 5-羥色胺的別名

5-HT;血清素

5 5-羥色胺的醫學檢查

5.1 檢查名稱

5-羥色胺

5.2 分類

激素類測定 > 腎上腺素測定

5.3 5-羥色胺的測定原理

由于一定量的組織中受體的數目是有限的,因此受體與配體的結合反應是可飽和的。若將不同濃度的放射性配體與受體膜制劑一起孵育,在反應達到平衡時,測定結合配基和游離配體的量,前者為放射性總結合量。同時在另一組相應各管內加入非標記的同一種配體以測定非專一結合量。總結合量與非專一結合量之差,即為特異性結合量。受體特異性結合量顯示受體膜制劑的有限結合能力。當放射性配體(3H-5-HT)達到某一濃度時,最高結合值趨于恒定。即受體與配體的結合量開始隨放射性配體濃度增加而增加,當放射性配體達到一定濃度時,受體與配體的結合達到飽和,利用此原理,本實驗測定5-羥色胺(5-HT)受體配體和大腦受體的結合容量(RT)及受體和配體結合的能力,用平衡解離常數Kd表示。它們的反應式如下:

式中R:受體,

L:配體;

V1:復合物RL形成速率;

V2:復合物的解離速率;

K1和K2:相應的速率常數,根據質量作用定律

若[]表示濃度,則

V1=K1[R][L]

V2=K2[RL]

當反應達到平衡時,V1=V2,即K1[R][L]=K2[RL],若以Kd代表K2/K1,則Kd的單位是濃度單位(mol/L),Kd越小表示親和力越大。

5.4 試劑

(1)儀器:液體閃爍計數器、超速離心機、低速冷凍離心機、高速分散勻漿器、超聲波粉碎儀、磁力攪拌器、恒溫水浴箱(37℃)、微量加樣器、69型玻璃纖維濾紙或GF/B瓦特曼玻璃纖維濾紙、多頭細胞收集器、手術器械。

(2)化學試劑:Tris,AR鹽酸、AR,抗壞血酸、AR,優降寧(pargyline)AR,3H-5HT、6×1012Bq/mmol、濃度3.7×107Bq/ml、放化純度>97%,PPO,POPOP、二甲苯、AR,5-羥色胺肌酐硫酸鹽。

(3)溶液配制

①50mmol/L Tris-HCl pH7.7。

②50mmol/L,Tris-HCl溶液,含0.1%抗壞血酸和10μmol優降寧,調pH至7.2。

③10μmol/L 5-HT溶液,用溶液②溶解5-羥色胺肌酐硫酸鹽,使濃度為10μmol,暗處保存備用,因在日光下極易氧化,所以要現配現用。

④放射性配體的配制:本實驗使用3H-5HT作為5-羥色胺受體的放射性配體。比活度為6×1012Bq/mmol/L,濃度為3.7×107Bq/ml。即3H-5HT599Bq/pmol,或3.7×104Bq/1μl。要求配制3H-5HT的化學濃度為242pmol/ml,根據上述要求,用微量加樣器精確地吸取3H-5HT 3.92μl置于小瓶中,用氮氣吹干,加入1ml溶液②搖勻備用。取20.66μl滴于濾紙上,80℃烘干1h,置于閃爍杯中,加入4ml閃爍液測量放射性,設儀器測量效率為44%,則應測得的計數為79121cpm/5pmol3H-5-HT。放冰浴中備用。

⑤0.4%PPO,0.02%POPOP二甲苯閃爍液。

5.5 操作方法

(1)膜受體制備:

①腦勻漿:大鼠或小鼠斷頭放血,將頭剪下置冰浴中,并用骨剪剪開頭顱立即取出大腦,除去包膜及殘血,剪碎后加入相當重量20倍體積的預冷的溶液①,用內切式高速分散器勻漿10000r/min,1min,再用超聲波粉碎器勻漿60s。全部過程在冰浴中進行。

②離心:腦勻漿在1000×g離心10min,除去細胞核致密物質,用滴管小心地將上清液移至另一離心管中,再用50000×g離心10min,棄去上清液,沉淀物再用溶液①洗滌離心2次。最后所得的沉淀物為含受體的細胞膜碎片。全部操作都在0~4℃進行。

③懸液:沉淀物用溶液②懸浮,再用超聲波粉碎器勻漿60s。然后用溶液②配成每毫升懸浮液中含腦組織濕重11.76mg。取0.2ml按lowry法測定其蛋白含量。放冰浴中備用。

(2)結合反應 反應總體積為2ml,試管分二部分,一部分為總結合反應管,另一部分非特異性結合反應管。

①總結合試驗:按表1順序逐項加試劑。

②非特異結合(NSB)試驗:本實驗以10-5mol/L的5-HT所抑制的結合配體為非特異性結合。用溶液②配制200nmol/L 5-HT溶液備用。按表2順序逐項加試劑。

③溫育:最后一項試劑膜受體加入后立即在混旋器上混勻,然后將管子置于恒溫水浴中37℃溫育10min,不停地振播,使結合反應達到平衡。

④結合配基和游離配基的分離溫育結束后立即將反應管置于冰浴中終止反應。A.用兩層69型玻璃纖維濾紙或GF/B玻璃纖維濾紙,以多頭細胞收集器進行減壓過濾,用冷的溶液①洗去未與受體結合的游離的放射性配基,可一次抽濾10管,每管用5ml溶液①洗3次,分離時間要在20s完成。分離完畢后,將濾紙置于盤內,80℃烘箱烘干1h。B.如果無多頭細胞收集器,可用負壓玻璃瓶逐管抽濾。這樣一次不能做太多管子,因為分離時間極短。做完一批之后再做第二批。

⑤測量:將烘干的濾膜按順序置于閃爍杯內,并加4ml閃爍液,用液體閃爍計數器測量其放射性。所得計數即為總結合配基的量。

(3)結果計算:反應體積是2ml,其中含有20mg濕重的腦組織。本實驗室液體閃爍計數器測量濾紙的效率是44%。數據處理目的是計算受體與放射性配基的結合總量(RT)以及它們的Kd常數。常用的方法有Scatchard法和Hill系數法。

Scatchard作圖法:

A.總結合管每管加入的3H-5-HT量,測得的cpm數(復管)。一般加入的3H-5-HT被受體結合的總量小于3%,即加入的3H-5-HT總量(LT)>>3H-5HT結合量(B),因為F=LT-B,所以F≈LT

B.計算非特異性結合量(NSB):為了減少NSB的誤差對特異結合的影響,我們先將實驗得到的數據進行直線回歸,然后根據方程求相應于每個總結合管的NSB期望值。這樣處理后可明顯減少NSB數據波動對實驗結果的影響。

C.計算特異性結合(B):

B=總結合(cpm)-NSB(cpm)

D.求游離配基量(F):加入3H-5HT總量(LT)>>3H-5-HT結合量(B),

∵F=LT-B ∴F≈LT

E.求B/F:

將上述各項計算綜合如表3。

以B/F為縱軸,B(pmol)為橫坐標作Scatehard圖。

在計算器上將上表中的B(pmol/g)值輸入X,B/F值輸入Y,求得直線回歸結果是:Y=-1.145X+29.1,r=-0.99,Kd=8.72nmol/L、BT=25.4pmol/g組織(腦)。

Hill作圖:Hill作圖的數據列于表4中。

表4中第一、二欄為3H-5-HT加入量及其對數。第三欄取自Scatehard作圖數據,Bmax=25.4pmol/g組織。第四、五欄為結合率及其對數,根據這些數據以log[3H-5-HT]為X軸,為Y軸繪Hill圖。經直線回歸斜率=0.94,Hill系數hH=1.0。kd=9.3nmol/L。這與Scatehard分析得到的kd=8.73沒有顯著差異。

5.6 正常值

血清0.22~2.06μmol/L (39~361ng/ml)

5.7 化驗結果臨床意義

(1)升高:類癌瘤綜合瘤綜合征、術后傾倒綜合征偏頭痛、低氧癥等。

(2)降低:系統性紅斑狼瘡SLE)、類風濕性關節炎風濕性關節炎)、混合性結締組織病結締組織疾病、帕金森病(震顫性麻痹)、舞蹈病、肝豆狀核變性Wilson病)、精神分裂癥神經衰弱等。

5.8 附注

食入大量的核桃香蕉后也可上升。

5.9 相關疾病

傾倒綜合征、偏頭痛、頭痛、系統性紅斑狼瘡、紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、混合性結締組織病、帕金森病、肝豆狀核變性、精神分裂癥、神經衰弱

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開放分類:化驗及醫學檢查激素類測定腎上腺素測定
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  • 評論總管
    2018/11/19 9:16:15 | #0
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本頁最后修訂于 2013年3月1日 星期五 0:25:02 (GMT+08:00)
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