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2010年版藥典三部附錄XIV

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1 拼音

2010 nián bǎn yào diǎn sān bù fù lù XIV

中華人民共和國藥典》(2010年版)三部附錄XIV 細菌生化反應培養基

下列各類培養基常用于測定細菌的糖類代謝試驗、氨基酸蛋白質代謝試驗、碳源和氮源利用試驗等生化反應。

1.1 1.糖、醇發酵培養基

(1)成分

基礎液

蛋白胨 10g

氯化鈉 5g

0.5%酸性品紅指示液 10ml

(或0.4%溴麝香草酚藍指示液)    (6ml)

水    1000ml

糖、醇類

每100ml基礎液內各加0.5g

(2)制法  取蛋白胨和氯化鈉加入水中,微溫使溶解,調pH值使滅菌后為7.3±0.1,加入指示液混勻。每100ml分別加入1種糖、醇或糖苷,混勻后分裝于小管中(若需觀察產氣反應,在小管內另放置杜漢小倒管)。于116℃滅菌15分鐘。

常用的糖、醇或糖苷:阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖果糖、甘露糖、半乳糖麥芽糖乳糖蔗糖、蕈糖、纖維二糖、蜜二糖、棉子糖、松三糖、菊糖糊精淀粉甘露醇衛矛醇山梨醇肌醇甘油、水楊素、七葉苷等。

(3)用途  鑒別各種細菌對糖類的發酵生化反應,發酵者產酸,培養基變色(加酸性品紅者由無色至紅色或再至黃色;加溴麝香草酚藍者由藍色至黃色);產氣時,小倒管內有小氣泡。

1.2 2.七葉苷培養基

1.3 (1)成分

蛋白胨 5g

七葉苷 3g

磷酸氫二鉀 1g

水 1000ml

枸櫞酸鐵 0.5g

(2)制法  除七葉苷外,取上述成分混合,微溫使溶解,加人七葉苷混勻,調pH值使滅菌后為7.3±0.1,分裝于試管中,121℃滅菌15分鐘。

(3)用途  用于鑒別細菌對七葉苷的水解試驗,產生棕黑色沉淀為陽性反應。

1.4 3.磷酸鹽葡萄糖胨水培養基

(1)成分

蛋白胨 7g

葡萄糖 5g

磷酸氫二鉀 3.8g

水 1000ml

(2)制法  取上述成分混合,微溫使溶解,調pH值使滅菌后為7.3±0.1,分裝于小試管中,121℃滅菌15分鐘。

(3)用途  用于鑒別細菌的甲基紅試驗(M-R反應)和乙酰甲基甲醇試驗(V-P反應)。

①甲基紅試驗(M-R反應)  取可疑菌落斜面培養物,接種于磷酸鹽葡萄糖胨水培養基中,置35℃培養2~5天,于培養管內加入甲基紅指示液(稱取甲基紅0.1g,加95%乙醇300ml,使溶解后,加水至500ml)數滴,立即觀察,呈鮮紅色或橘紅色為陽性,呈黃色為陰性

②乙酰甲基甲醇生成試驗(V-P反應)  取可疑菌落或斜面培養物,接種于磷酸鹽葡萄糖胨水培養基中,置35℃培養48小時,量取2ml培養液,加入α-萘酚乙醇試液(稱取α-萘酚5g,加無水乙醇溶解使成100ml)1ml,混勻,再加40%氫氧化鉀溶液0.4ml,充分振搖,立刻或數分鐘內出現紅色,即為陽性反應;無紅色反應為陰性,如為陰性反應,置35℃水浴4小時后再觀察。

1.5 4.蛋白胨水培養基

(1)成分

蛋白胨 10g

水 1000ml

氯化鈉 5g

(2)制法  取上述成分混合,微溫使溶解,調pH值使蔑菌后為7.3±0.1,分裝于小試管.121℃滅菌15分鐘。

(3)用途  用于鑒別細菌能否分解色氨酸而產生靛基質的生化反應。

①靛基質試驗  取可疑菌落或斜面培養物,接種于蛋白胨水培養基中,置35℃培養24~48小時,必要時培養4~5天,沿管壁加入靛基質試液數滴,液面呈玫瑰紅色為陽性,呈試劑本色為陰性。

②靛基質試液  稱取對二甲氨基苯甲醛5g,加入戊醇(或異戊醇)75ml,充分振搖,使完全溶解后,再取鹽酸25ml徐徐滴入,邊加邊振搖,以免驟熱導致溶液色澤變深。或稱取對二甲氨基苯甲醛1g,加入95%乙醇95ml,充分振搖,使完全溶解后,再取鹽酸20ml徐徐滴入。

1.6 5.三糖鐵瓊脂培養基

(1)成分

蛋白胨 20g

硫酸亞鐵 0.2g

牛肉浸出粉 5g

硫代硫酸鈉 0.2g

乳糖 10g

0.2%酚磺酞指示液 12.5ml

蔗糖 10g

瓊脂 12~15g

葡萄糖 1g

水 1000ml

氯化鈉 5g

(2)制法  除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、瓊脂外,取上述成分,混合,加熱使溶解,調pH值使滅菌后為7.3±0.1,加入瓊脂,加熱溶脹后,再加入其余成分,搖勻,分裝,121℃滅菌15分鐘,制成高底層(2~3cm)短斜面。

(3)用途  用于初步鑒別腸桿菌科細菌對糖類的發酵反應和產生硫化氫試驗。

方法和結果觀察:取可疑菌落或斜面培養物,做高層穿刺和斜面劃線接種,置35℃培養24~48小時,觀察結果。培養基底層變黃色為葡萄糖發酵陽性,斜面層變黃色為乳糖、蔗糖發酵陽性;底層或整個培養基呈黑色表示產生硫化氫。

1.7 6.克氏雙糖鐵瓊脂培養基

(1)成分

蛋白胨 20g

枸櫞酸鐵 0.3g

牛肉浸粉 3g

硫代硫酸鈉 0.3g

酵母浸粉 3g

0.2%酚磺酞指示液 12.5ml

乳糖 10g

瓊脂 12~15g

葡萄糖 1g

水 1000ml

氯化鈉 5g

(2)制法  除乳糖、葡萄糖、指示液、瓊脂外,取上述成分,混合,加熱使溶解,調pH值使滅菌后為7.3±0.1,加入瓊脂,加熱溶脹后,再加入其余成分,搖勻,分裝,121℃滅菌15分鐘,制成高底層(2~3cm)短斜面。

(3)用途  用于初步鑒別腸桿菌科細菌對糖類的發酵反應和產生硫化氫試驗。

方法和結果觀察:取可疑菌落或斜面培養物,做高層穿刺和斜面劃線接種,置35℃培養24~48小時,觀察結果。培養基底層變黃色為葡萄糖發酵陽性,斜面層呈黃色為乳糖發酵陽性,斜面層呈紅色為乳糖發酵陰性;底層或整個培養基呈黑色表示產生硫化氫。

1.8 7.脲(尿素)培養基

(1)成分

蛋白胨 1g

0.2%酚紅溶液 6ml

葡萄糖 1g

20%無菌脲溶液 100ml

氯化鈉 5g

水 1000ml

磷酸氫二鉀 2g

(2)制法  除脲溶液外,取上述成分,混合,調pH值使滅菌后為6.9±0.1,混勻后,121℃滅菌15分鐘,冷至50~55℃,加入無菌脲溶液(經膜除菌過濾),混勻,分裝于滅菌試管中。

(3)用途  用于鑒別細菌的尿素酶反應。

方法和結果觀察:取可疑菌落或少量斜面培養物接種于培養基內,置35℃培養24小時,觀察結果。培養基變為紅色為尿素酶反應陽性;不變色為陰性,陰性者需延長觀察至1周。

1.9 8.苯丙氨酸瓊脂培養基

(1)成分

磷酸氫二鈉 1g

氯化鈉 5g

酵母浸膏 3g

瓊脂 12~15g

DL-苯丙氨酸(DL-phenylalanine) 2g

水 1000ml

(或L-苯丙氨酸)  (1g)

(2)制法  除瓊脂外,取各成分溶于水,調pH值使滅菌后為7.3±0.1,再加入瓊脂,加熱溶脹,分裝試管,121℃滅菌15分鐘,制成長斜面。

(3)用途  用于鑒別細菌的苯丙氨酸脫氨酶試驗(也稱苯丙酮酸試驗)。

方法和結果觀察:取斜面培養物,大量接種于苯丙氨酸瓊脂斜面,置35℃培養4小時或18~24小時,取4~5滴10%三氯化鐵溶液試劑,由斜面上部流下,若出現墨綠色,即為苯丙氨酸脫氨酶試驗陽性;倘若不變色則為陰性。

1.10 9.氨基酸脫羧酶試驗培養基

(1)成分

①基礎液

蛋白胨 5g

1.6%溴甲酚紫指示液 1ml

酵母浸出粉 3g

水 1000ml

葡萄糖 1g

⑦氨基酸

L-賴氨酸 0.5g(需加堿溶液溶解)

L-鳥氨酸    0.5g  (需加堿溶液溶解)

L-精氨酸    7.5g  (不需加堿溶液溶解)

(2)制法

先配制基礎液備用;將溶解后的3種氨基酸,各分別加至100ml基礎液(使氨基酸的終濃度為0.5%),混勻,調pH值使滅菌后為6.8。分裝于小試管中,每管2.5ml并滴加1層液體石蠟;同時分裝一部分基礎液于小試管,作為對照培養基,均置116℃滅菌10分鐘。

(3)用途  用于鑒別細菌的脫羧酶、雙水解酶試驗。方法和結果觀察:取疑似菌斜面培養物分別接種于上述3種培養基及基礎液對照培養基,置35℃培養24~48小時。在培養初期由于待檢細菌發酵葡萄糖產酸,試驗培養基和對照培養基應呈黃色,繼續培養時,試驗培養基如呈紫色或紫紅色,即為陽性反應;如至培養末期,培養基仍同對照管呈黃色,則判為陰性反應。

1.11 10.明膠培養基

(1)成分

蛋白胨 5g

明膠 120g

牛肉浸出粉 3g

水 1000ml

(2)制法  取上述成分加入水中,浸泡約20分鐘,加熱溶解,調pH值使滅菌后為7.3±0.1,分裝于小試管中,121℃滅菌15分鐘。

(3)用途  用于細菌的明膠液化試驗。

方法和結果觀察:取少量待檢菌斜面培養物穿刺接種于明膠培養基內,置35℃培養24小時,取出置冰箱內10~20分鐘。如培養基仍呈溶液狀,則為陽性;培養基重新凝固,則為陰性。細菌液化明膠之作用有時甚為緩慢,如未見液化,需繼續培養1~2周方可確定陰性。

1.12 11.丙二酸鈉培養基

(1)成分

酵母浸出粉1g

磷酸二氫鉀 0.4g

氯化鈉 2g

丙二酸鈉 3g

葡萄糖 0.25g

0.4%溴麝香草酚藍指示液6ml

硫酸銨 2g

水 1000ml

磷酸氫二鉀 0.6g

(2)制法  除指示液外,將上述成分溶解,調pH值使滅菌后為6.8.再加入指示液。分裝小管中,121℃滅菌15分鐘。

(3)用途  用于鑒別細菌能否利用丙二酸鈉作為碳源而生長繁殖。

方法和結果觀察:取斜面或肉湯培養物接種于丙二酸鈉培養基內,置35℃培養48小時。于24小時和48小時后各觀察1次結果。培養基顏色由綠色變成藍色為陽性反應;無顏色變化,或由綠色變成黃色,則為陰性反應。

1.13 12.枸櫞酸鹽培養基

(1)成分

氯化鈉 5g

枸櫞酸鈉(無水) 2g

硫酸鎂 0.2g

1.0%溴麝香草酚藍指示液10ml

磷酸氫二鉀1g

瓊脂 14g

磷酸二氫銨1g

水 1000ml

(2)制法  除指示液和瓊脂外,取上述成分,混合,微溫使溶解,調pH值使滅菌后為6.9±0.1,加入瓊脂,加熱溶脹,然后加入指示液,混勻,分裝于小試管中,121℃滅菌15分鐘,制成斜面。

(3)用途  用于鑒別細菌能否利用枸櫞酸鹽作為碳源和氮源而生長繁殖。

方法和結果觀察:取可疑菌落或斜面培養物,接種于枸櫞酸鹽培養基的斜面上,一般培養48~72小時,凡能在培養基斜面生長出菌落,培養基即由綠色變成藍色者為陽性反應;無菌落生長,培養基仍綠色者為陰性反應,陰性反應者應繼續培養觀察至7天。

1.14 13.硝酸鹽胨水培養基

(1)成分

蛋白胨 10g

硝酸鉀 2g

酵母浸出粉 3g

水 1000ml

(2)制法  取上述成分,加熱溶解,調pH值使滅菌后為7.3±0.1,分裝于小試管中,121℃滅菌15分鐘。

(3)用途  用于鑒別細菌能否還原硝酸鹽成亞硝酸鹽。

方法和結果觀察:取待檢菌培養物接種于硝酸鹽胨水培養基中,置35℃培養24小時。將下列甲液和乙液于用前等量混合,每個培養物加混合物0.1ml,產生紅色為陽性反應,不產生紅色為陰性反應。

甲液:稱取α-萘胺5g,溶解于5mol/L醋酸1000ml中。乙液:稱取磺胺酸(對氨基苯磺酸)8g,溶解于5mol/L醋酸1000ml中。

1.15 14.石蕊牛奶培養基

(1)成分

脫脂奶粉 10g

水 100ml

10%石蕊溶液 0.65ml

(2)制法  取上述成分混勻后,分裝于小試管中,116℃滅菌10分鐘。

(3)用途  用于檢查細菌對牛奶的凝固和發酵作用。

1.16 15.半固體營養瓊脂培養基

(1)成分

蛋白胨 10g

瓊脂 4g

牛肉浸出粉 3g

水 1000ml

氯化鈉 5g

(2)制法  除瓊脂外,取上述成分,混合,微溫使溶解,調pH值使滅菌后為7.2±0.2,再加入瓊脂,加熱溶脹,分裝于小管中,121℃滅菌15分鐘后,直立放置。待凝固后備用。    (3)用途  用于觀察細菌的動力,也可用于一般菌種保存

細菌動力檢查:取疑似菌斜面培養物穿刺接種于半固體營養瓊脂培養基中,置35℃培養24小時,細菌沿穿刺外周擴散生長,為動力陽性;否則為陰性。陰性者,應再繼續培養觀察2~3天。

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    2019/10/15 14:13:29 | #0
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本頁最后修訂于 2015年1月14日 星期三 14:03:43 (GMT+08:00)
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