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β-半乳糖苷酶

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1 拼音

β-bàn rǔ táng gān méi

2 英文參考

β-galactosidase

3 概述

β-半乳糖苷酶是一種能把乳糖水解成葡萄糖半乳糖的酶。EC3.2.1.23。一般是指能將β-半乳糖苷水解為半乳糖和糖苷的酶。很早以來,就被認為是大腸桿菌誘導酶的典型。分子量54萬,為四聚體。其結構基因為LacZ,與LacY(半乳糖苷透性酶)和LacA(半乳糖苷轉乙酰酶)同組成乳糖操縱子,并在特異的乳糖操縱系統中的阻遏物操縱基因啟動子等的協同下,支配調節β-半乳糖苷酶的合成。當培養基中無誘導物質時,每一細胞中雖然沒有幾個分子的β-半乳糖苷酶;但一旦被誘導,則每一世代都能合成多達幾千個分子的酶。另外,β-半乳糖苷酶一般廣泛存在于動植物界中。

GAL是細胞溶酶體中的水解酶,在腎近曲小管上皮細胞中含量較高。尿中GAL活性可反映腎實質,特別是腎小管的早期損傷,與尿中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)一同測定作尿酶譜分析,有助于病程觀察和預后評價。在遺傳學域中對人類β-半乳糖苷酶缺陷病的診斷(包括產前診斷)和基礎研究也是重要的指征。國內近年合成了2-氯-4-硝基酚-β-半乳糖苷(CNP-GAL)作為GAL測定的色原底物,實現了GAL的速率法分析,可用于生化自動分析儀。

4 β-半乳糖苷酶的醫學檢查

4.1 檢查名稱

β-半乳糖苷酶

4.2 分類

血液生化檢查 > 酶類測定

4.3 β-半乳糖苷酶的測定原理

樣品中GAL在規定溫度和pH下作用于底物CNP-GAL的糖苷鍵進行水解,生成色原CNP,可在400~405nm波長測定每分鐘吸光度變化(△A),即CNP生成速度,據此計算GAL活性。

4.4 試劑

(1)檸檬緩沖液(50mmol/L, pH5.0)

稱檸檬酸(MW210.14)        4.2g

檸檬酸三鈉(MW294.12)      8.8g

β-環糊精(β-cyclodextrin)  4g

用水溶解后定容至1L,調pH5.0

(2)底物溶液(2mmol/L CNP-GAL):取CNP-GAL(MW335.71)34mg,用檸檬酸緩沖液(50mmol/L,pH5.0)溶解后定容至50ml。

4.5 操作方法

(1)手工速率法:尿樣100μl,加入底物溶液1.0ml,混勻后測初始吸光度A1,并立即啟動秒表計時,37℃保溫10min整,立即測第2吸光度A2。波長400~405nm,算出1min吸光度變量

酶活性計算:

式中VT反應溶液總體積;

VS:樣品體積;

ε:CNP在規定pH(5.0)和波長下的摩爾吸光系數

1:光徑(cm)。

例如:

[注]4965為pH5.0,波長405nm下CNP的摩爾消光系數實測值,此值應在各實驗室所用分析儀器上自行測定計算。

(2)連續監測法:在自動分析儀或半自動分析儀上作連續監測分析時要根據所用儀器型號自行設定實驗參數。

4.6 正常值

血清0.2~0.4U/L尿中GAL排出率,參考范圍2.5~14.3IU/gCr

4.7 臨床意義

尿中GAL和NAG同屬細胞溶酶體酶,主要來源于腎小管上皮細胞,因而對腎小管損傷和后天性疾患有較敏感的反應,在腎實質損傷的不同階段,GAL和NAG的排出率曲線有一定差異,二者用于酶譜分析,會有助于臨床診斷及預后的評價。

4.8 附注

(1)本方法線性范圍可達220IU/L。

(2)緩沖液pH對消光系數有明顯影響,對pH要求準確校正到規定值。

(3)其余可參閱“N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶”部分。

(4)在遺傳學領域的應用可參閱有關專著及文獻。

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開放分類:生物學
詞條β-半乳糖苷酶banlang创建
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  • 評論總管
    2019/10/21 0:24:33 | #0
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